【摘 要】
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构建草鱼固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)基因3端非翻译区(untranslated region,UTR)双荧光素酶报告基因载体,并通过检测
【机 构】
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河南师范大学水产学院,河南省水产动物养殖工程技术研究中心,河南,新乡,453007
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构建草鱼固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)基因3端非翻译区(untranslated region,UTR)双荧光素酶报告基因载体,并通过检测荧光素酶活性,初步分析可能调控SREBP-1基因的microRNAs.实验采用PCR方法扩增SREBP-1基因3-UTR区序列,双酶切后插入到pmirGLO双荧光素酶报告载体中,经PCR、限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定正确后,采用lipofectamine 3000转染试剂将构建好的双荧光素酶报告载体和miR-33 mimics共转染于L8824细胞中,双荧光素酶检测试剂盒测荧光素酶活性.
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