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目的 胎儿血红蛋白(feta1 hemoglobin,HbF) (α2γ2)是胎儿红细胞中一种主要的胞浆蛋白.依据其特有的发育规律,利用多肽合成技术制备抗胎儿血红蛋白γ链的抗体,探讨其用于检测孕妇外周血中胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cell,fNRBC)进行无创性产前基因诊断的可行性.方法针对胎儿血红蛋白的特异性抗原表位,选定HbF-γ特异的1 1个氨基酸残基的肽段为免疫原,将人工合成的HbF γ链的多肽,与载体蛋白(KLH)偶联后免疫羊,制备羊抗人的胎儿血红蛋白的抗血清,经protein G纯化后,HbF特异性抗体标记、识别、显微操作法富集母体循环中的fNRBC,引物延伸预扩增后,利用16个STR位点复合扩增法对32例孕妇母体循环中富集的NRBC进行扩增,同时用碘化钠法常规提取孕妇外周血白细胞DNA作为比对.用于孕妇外周血中富集的HbF阳性细胞胎儿来源的遗传学鉴定.结果经H bF特异性抗体标记的免疫组化实验证实该抗体能对fNRBC中的血红蛋白定位识别,其识别的分子位于胞浆内,与HbF的定位相一致.经HbF多克隆抗体进行标记,NRBC联苯胺染色,光学显微镜下可见NRBC胞浆呈棕黄色,苏木素复染后胞核呈蓝色,明显区分于其它细胞,识别效果优于常规瑞氏--(Giemsa染色.32例样本每例出现NRBC3～9个/5ml,共183个,平均为6.6个/5ml,经STR基因位点鉴定,准确率为90.6％.结论利用多肽合成技术制备的抗胎儿血红蛋白γ链的抗体联合免疫组化法能有效识别母血中的胎儿有核红细胞,该技术可使单个胎儿细胞或微量胎儿DNA扩增出足够量的DNA模板来进行标本DNA多位点遗传分析,联苯胺染色后显微操作法能高效、准确地识别并获取单个NRBC,结合引物延伸预扩增技术,可望用于无创性产前基因诊断.具有深远的应用前景.