【摘 要】
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目的：克隆人HMGB1 cDNA,构建重组原核表达载体,对其诱导表达并鉴定,为设计HMGB1 cDNA突变体及诱导表达可竞争性抑制HMGB1炎症效应的突变体蛋白奠定基础.方法：提取人新鲜扁
【机 构】
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第三军医大学西南医院烧伤科 重庆400038
【出 处】
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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会
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目的：克隆人HMGB1 cDNA,构建重组原核表达载体,对其诱导表达并鉴定,为设计HMGB1 cDNA突变体及诱导表达可竞争性抑制HMGB1炎症效应的突变体蛋白奠定基础.方法：提取人新鲜扁桃体组织总RNA,经RT-PCR扩增出人HMGB1 cDNA序列,并克隆至载体pUC18进行序列测定,随后构建于原核表达载体pQE-80L中,经IPTG诱导4h后,可表达Mr约30 000的蛋白.Western Blotting鉴定所表达的目的蛋白.结果：经RT-PCR扩增得到了648bp的cDNA,经序列分析与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了HMGB1蛋白的重组表达质粒,诱导表达了目的蛋白,经Western Blotting证实,在Mr约为30 000处有一条清楚的蛋白带.结论：HMGB1 cDNA的克隆,原核表达载体的构建及目的蛋白的表达鉴定.
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