【摘 要】
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HSP10作为一种小分子热休克蛋白，在蛋白质的正确折叠、组装及防止热诱导的蛋白质聚集等方面发挥了重要功能.本研究采用RT-PCR法从家蚕卵巢细胞总RNA中克隆出HSP10基因，并构建原核表达质粒(pET32a-HSP10).利用E.coli (BL21)菌株，大量表达HSP10.利用亲和层析和分子筛层析方法得到纯度较高的HSP10蛋白.纯化后的HSP10用于免疫新西兰大白兔制备HSP10多克隆抗体
【机 构】
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江苏科技大学,江苏镇江212018 江苏科技大学,江苏镇江212018;中国农业科学院蚕业研究所,
【出 处】
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全国农业生物化学与分子生物学第十四届学术研讨会
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HSP10作为一种小分子热休克蛋白，在蛋白质的正确折叠、组装及防止热诱导的蛋白质聚集等方面发挥了重要功能.本研究采用RT-PCR法从家蚕卵巢细胞总RNA中克隆出HSP10基因，并构建原核表达质粒(pET32a-HSP10).利用E.coli (BL21)菌株，大量表达HSP10.利用亲和层析和分子筛层析方法得到纯度较高的HSP10蛋白.纯化后的HSP10用于免疫新西兰大白兔制备HSP10多克隆抗体，用聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹鉴定HSP10表达、纯化及抗体制备效果.结果表明从BmN细胞中成功克隆出家蚕HSP10基因能在原核表达系统中大量表达，并以多聚体形式存在，利用纯化的蛋白制备的抗体具有较好的特异性，为后续的HSP10蛋白的功能研究奠定了基础.
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