【摘 要】
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右旋糖酐蔗糖酶(EC2.4.1.5)是一种由肠膜状明串珠菌产生的葡萄糖基转移酶。该酶以蔗糖为底物，催化生成右旋糖酐或低聚糖，广泛应用于医药、食品、色谱分析等多个领域。本研究借
【机 构】
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合肥工业大学化工学院制药工程系 合肥 230009
【出 处】
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2009年中国药学大会暨第九届中国药师周
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右旋糖酐蔗糖酶(EC2.4.1.5)是一种由肠膜状明串珠菌产生的葡萄糖基转移酶。该酶以蔗糖为底物，催化生成右旋糖酐或低聚糖，广泛应用于医药、食品、色谱分析等多个领域。本研究借助PCR技术从肠膜状明串珠菌基因组中克隆出了右旋糖酐蔗糖酶基因并对序列进行了分析，研究了高效表达右旋糖酐蔗糖酶工程菌的构建、表达条件及其酶学性质。结果：如下:利用PCR扩增技术，从肠膜状明串珠菌基因组DNA中克隆得到了右旋糖酐蔗糖酶基因的完整基因（dexYG），并完成了测序工作。该酶基因共有碱基4584bp,提交并被美国GenBank文库收录，登录号为DQ345760。通过亚克隆技术，构建得到能有效表达的工程菌株BL21(DE3)/pET28-dexYG。通过对培养时间、IPTG浓度、培养温度、菌浓（OD600）和pH值等产酶因素的优化考察，得到最佳培养条件为:培养时间5h、IPTG浓度0.5mmol/L、25℃、OD600值1.0和pH6.0。酶活力由最初的5.39U/mL提高到35.62U/mL。对重组右旋糖酐蔗糖酶酶学性质进行了研究。该酶最适反应温度为30℃，最适pH值为5.4，最适底物浓度为8％蔗糖。0.5mmol/LCa2+对酶活力很强的促进作用，能使酶活提高3.8倍，Mg2+对酶活力有微弱促进作用，Cu2+和Zn2+对酶活力有强的抑制作用。右旋糖酐蔗糖酶在25℃保温1h后活力没有明显的降低，30℃保温1h后剩余活力为原来的64％，温度达到35℃保温1h后酶全部失活，表明该酶的在35℃以上的热稳定性差;用双倒数作图法计算得到Km=0.01013mol/L。本研究为重组右旋糖酐蔗糖酶游离酶的获取、得到稳定性好、活性高的酶反应体系及工业化应用提供了重要参数。
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