牛病毒性腹泻病毒玛纳斯株E2基因的克隆及主要抗原表位区域的分段表达

• 作 者: 钟发刚[1]程安春[2]王新华[3]黄新[3]
• 机 构: 四川农业大学动物医学院四川,雅安 625014 新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆,石河子,832000
• 出 处: 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会教学专业委员会第六届第12次学术研讨会
• 发表日期: 2008年期

应用RT-PCR方法扩增BVDV新疆玛纳斯分离株获得E2基因序列，结果显示：测序获得全长1122bp E2基因，编码374个氨基酸残基；应用软件对序列分析分析，对可能存在的抗原表位预测；通过PCR分别扩增了含主要抗原位点的片段(1-118)-(144-340)-(100-300)-(1-345)，并克隆到pMD 18-T Simple载体中；将重组质粒pMD-(1-118)、pMD-(144-340)、pMD-(100-300)、pMD-(1-345)的Hind Ⅲ和Bam H I双酶切产物分别插入pET28a(+)，构建原核表达载体pET-(1-118)、pET-(144-340)、pET-(100-300)、pET-(1-345)。将这些原核表达载体分别导入BL21（DE）后用IPTG进行诱导表达，收集的菌液进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果表明4个重组质粒在BL21（DE）成功表达，表达融合蛋白的相对分子量分别为18.6ku、28.2ku、29.2ku、43.8ku，与预测蛋白分子量一致，28.2ku、29.2ku、43.8ku的融合蛋白被牛抗BVDV阳性血清识别。初步推测，E2蛋白的100-300氨基酸的区域存在一个未曾报道的抗原表位。