白细胞相关Rho鸟苷转移因子(LARG)在红系发育中有重要作用

• 作 者: 高莉;谢扬阳;米蔷;王翔;沈树红;
• 机 构: 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心血液肿瘤科 200127
• 出 处: 第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议
• 发表日期: 2014年期

目的：LARG(Rho鸟苷转移因子12)首先是作为MLL重排的融合伙伴发现的,发现它在红系造血细胞中搞表达提示和红系发育相关.为此希望通过细胞及模式动物研究LARG在红系发育的作用.
方法：针对LARG的shRNA慢病毒分别感染红白血病细胞株K562和CD34阳性脐血细胞,观察其红系分化情况;通过Mopholino敲低斑马鱼LARG的表达,观察红系发育情况;通过抗体芯片检测shRNA慢病毒感染并敲低LARG表达的K562的多种激酶磷酸化;mRNA显微注射观察候选基因对敲低LARG造成的斑马鱼胚胎的红系造血异常的纠正作用.
结果：LARG的shRNA慢病毒分别感染红白血病细胞株K562和CD34阳性脐血细胞后，红系分化明显受阻。Mopholino敲低斑马鱼LARG的表达可以使受精3天后的斑马鱼胚胎红细胞明显减少而且相对幼稚。表现为0-dianisidine染色细胞减少，珠蛋白相关基因表达细胞减少。这种敲低LARG造成的红系异常可以被LARG的底物RhoA的活化突变体纠正，而相反RhoA的显性负突变体本身可以造成和敲低LARG一样的红系发育异常。提示LARG对红系的影响通过激活RhoA实现。抗体芯片检测到shRNA慢病毒感染敲低LARG表达的K562细胞中P38MAPK的磷酸化程度明显降低。而目且过茴香霉素激活P38后也可以纠正敲低LARG造成的斑马鱼红系异常。说明LARG通过RhoA激活P38后影响红系发育。
结论：红系中高表达的LARG基因在人类私斑马鱼中高度保守，同样可以通过RhoA激活P38并对红系造血具有重要作用。