【摘 要】
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目的：微生物群异常是炎症性肠病(IBD)发病中的重要环节,口腔是IBD患者肠外损害发生的靶器官之一,其发病常与肠道病情平行.本研究初步探讨IBD患者与健康人口腔微生物群的多态性和差异,为探索IBD发病提供新思路.方法：(1)采集IBD及健康人群口腔微生物样本选取北京大学人民医院消化内科就诊的IBD患者10例,年龄在18～70岁；另选取与入选IBD患者年龄、性别匹配的健康人10例作为对照.排除标准为
【机 构】
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北京大学人民医院消化内科 北京大学口腔医院中心实验室
【出 处】
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2014中华医学会北京分会消化系病学术年会
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目的：微生物群异常是炎症性肠病(IBD)发病中的重要环节,口腔是IBD患者肠外损害发生的靶器官之一,其发病常与肠道病情平行.本研究初步探讨IBD患者与健康人口腔微生物群的多态性和差异,为探索IBD发病提供新思路.方法：(1)采集IBD及健康人群口腔微生物样本选取北京大学人民医院消化内科就诊的IBD患者10例,年龄在18～70岁；另选取与入选IBD患者年龄、性别匹配的健康人10例作为对照.排除标准为近2周内应用抗生素者、益生菌患者.用无菌棉签分别收集患者或对照舌背和颊部菌斑,如患者合并口腔病损,则在病损部位收集标本.样本采集后即刻在-80℃冰箱中保存,直至进行DNA提取.(2)生物学处理使用Wizardt天根细菌基因组试剂盒进行样本中细菌DNA的提取.使用Nanodrop 8000分光光度计测量其DNA浓度,并将其浓度稀释至10ng/μL.PCR扩增细菌16S rRNA基因v1-v3可变区,并进行454平台测序.上述操作均由华大公司实验室完成.(3)测序后生物信息分析依据样本标签序列进行序列分拣.去除低质量、短片段序列后,按97％相似性将序列聚类成操作分类单元(OTUs).注释OTUs的物种信息.计算alpha多样性和beta多样性,并绘制健康人和IBD患者口腔微生物的核心菌群图.结果 健康对照组与IBD组的微生物群落组成不同.按照97％相似度,我们最终检测出2620 0TUs.其中,IBD组中有1023个OTU,健康对照组中有2217种OUT；两组共同OUT有620种.另有403种OUT为IBD患者特有(图1).根据样本稀释曲线,大部分样本DNA提取和测序的质量较高,结果较为可靠(图2).结论 利用16S rDNA高通量测序技术对IBD及健康人群微生物样本进行组成成分与多样性分析,发现IBD患者与健康人群间口腔微生物群存在差异.口腔作为消化道的窗口,可以反映消化道的情况,而相对于粪便和结肠镜活检,口腔标本具有无创、取材方便、可重复性好等优势,本研究的进一步深入具有潜在的诊断和预测价值.
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