【摘 要】
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目的：探讨人脂肪间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及向肝脏样细胞分化的方法。方法：将脂肪组织切成小于1 mm3的碎片,用胶原酶I消化离心法获得人脂肪间充质干细胞,倒置显微镜观察细胞形态及生长情况；取第5代细胞接种于24孔板中,计算细胞数量,取其平均数绘制细胞生长曲线；取第5代细胞,用流式细胞仪检测干细胞相关表面抗原CD13、CD73、CD34、CD45和HLA-DR；取第5代细胞用诱导培养基诱导,检
【机 构】
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解放军总医院南楼临床部消化内科 解放军总医院输血科
【出 处】
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2014中华医学会北京分会消化系病学术年会
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目的：探讨人脂肪间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及向肝脏样细胞分化的方法。方法：将脂肪组织切成小于1 mm3的碎片,用胶原酶I消化离心法获得人脂肪间充质干细胞,倒置显微镜观察细胞形态及生长情况；取第5代细胞接种于24孔板中,计算细胞数量,取其平均数绘制细胞生长曲线；取第5代细胞,用流式细胞仪检测干细胞相关表面抗原CD13、CD73、CD34、CD45和HLA-DR；取第5代细胞用诱导培养基诱导,检测其多向分化潜能；取第5代细胞,用含有ActivinA、HGF、FGF、EGF、OSM、DMSO等细胞因子的两阶段法诱导培养,并观察细胞形态变化及生长情况,诱导至第13天时,采用RT-PCR法检测肝细胞相关基因表达,采用PAS染色法检测肝脏样细胞糖原合成情况,采用细胞免疫组化法检测肝细胞相关抗原的表达。结果：消化离心法获取的脂肪间充质干细胞大小均匀,呈梭形的成纤维细胞样,细胞增殖良好；接种后第3天细胞进入指数增长期,第6天后生长进入平台期,体外能长期培养存活,并保持不分化状态；该细胞高表达CD13、CD73,低表达CD34、CD45及HLA-DR,并能被诱导成脂肪细胞及成骨细胞；上述结果表明人原代脂肪干细胞系建立。人脂肪干细胞经成肝诱导后,细胞形态由梭形逐渐变为多角形或类圆形。诱导至第13天时,RT-PCR检测结果提示,实验组细胞高表达ALB、AFP、CY3P4肝细胞相关基因,而对照组细胞呈低表达及无表达状态；实验组细胞PAS染色呈红色阳性表现；细胞免疫组化证实,实验组细胞高表达肝细胞特异性抗体HepPar-1、AFP、CK18、CK19,与肝癌细胞表达相同,而对照组细胞则表现为阴性。结论：利用消化离心法在体外能分离得到脂肪间充质干细胞,在体外可长期存活,反复传代,诱导后可分化为肝脏样细胞,为脂肪干细胞做为细胞治疗、生物人工肝及肝组织工程的种子细胞提供理论依据。
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