【摘 要】
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作为重要的表观遗传修饰方式之一,DNA甲基化与许多重要的生理过程息息相关,成为热点研究问题.本文结合化学氧化断链的选择性和恒温指数扩增的信号放大作用建立了一种高灵
【机 构】
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中山大学化学与化学工程学院,广州新港西路135号,510275
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作为重要的表观遗传修饰方式之一,DNA甲基化与许多重要的生理过程息息相关,成为热点研究问题.本文结合化学氧化断链的选择性和恒温指数扩增的信号放大作用建立了一种高灵敏度的DNA特异位点甲基化检测方法.利用NaIO4/LiBr体系对目标p53基因片段中甲基化位点的氧化作用,在热哌啶处理后发生氧化断链,产生的短链DNA作为引物,触发恒温指数扩增反应,在聚合酶和切口酶的共同作用下延伸、切割、链置换反复循环扩增,生成大量引物链,用荧光和电化学方法进行检测.在荧光染料SYBR Green I的指示下,甲基化的p53基因片段在1 pM到10 nM浓度范围内与荧光强度呈良好线性关系,检出限为4.22aM(S/N=3).并且,通过溶出伏安法检测酸解引物链生成的大量嘌呤碱基,甲基化的p53基因片段在1pM到10 nM浓度范围内与嘌呤碱基的电化学响应呈良好线性关系,检出限为251 aM(S/N=3).该方法无需使用重亚硫酸盐反应和限制性内切酶,在恒温条件下实现高灵敏度DNA特异位点甲基化检测.
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