【摘 要】
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目的：克隆、表达和鉴定猪流感病毒A/swine/Henar/1/2010(H3N2)的核蛋白基因(NP)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法：用RT-PCR扩增核蛋白基因,将其定向克隆到pET-28a(+
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002
【出 处】
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河南省畜牧兽医学会第八届会员代表大会暨2013年学术研讨会
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目的：克隆、表达和鉴定猪流感病毒A/swine/Henar/1/2010(H3N2)的核蛋白基因(NP)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.方法：用RT-PCR扩增核蛋白基因,将其定向克隆到pET-28a(+)原核表达载体并测序,在大肠杆菌Rosetta中表达,用SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物.结果：所克隆的核苷酸片段与预期的核蛋白基因一致,编码498个氨基酸;构建的重组表达载体在大肠杆菌Rosetta中表达出了相对分子质量约60ku的重组核蛋白,且主要以包涵体形式存在.结论：克隆和表达了H3N2猪流感病毒核蛋白编码区基因,为获得大量NP蛋白用于制备多克隆抗体,以及为猪流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础.
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