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力达霉素(LDM)是一种强烈的DNA损伤的抗肿瘤药物，目前正在进行临床实验。能够找到致敏剂以降低给药剂量使肿瘤细胞对LDM的敏感性提高将具有一定的应用价值。在实验中发现热休克蛋白抑制剂可以增强低剂量力达霉素对卵巢癌SKOV3细胞的杀伤作用，本实验就其机制进行一系列实验并加以分析。MTT方法检测两药合用生长曲线和联合用药指数；细胞周期分析了Hsp90抑制剂与LDM联合应用时对细胞周期的影响；免疫荧光和彗星电泳实验检测细胞在不同时间、不同药物配伍时发生DNA断裂的情况；Westernblot用于检测Hsp90抑制剂和LDM联合应用后DNA损伤后修复通路的影响。细胞毒实验显示geldanamycin和本实验室改造的一种geldanamycin衍生物GUM在一定的剂量下增强低剂量LDM(0.01nM、0.05nM)杀伤肿瘤效果，增加PARP的切割；细胞周期实验发现Hsp90抑制剂抑制由低剂量LDM诱导的SKOV3的G2／M期阻滞；彗星电泳实验发现单独应用低剂量LDM或geldanamycin处理细胞24h都不能看到明显的彗尾，两种药物联合应用时可看到明显的彗尾；免疫荧光实验观察到γH2AX在两药合用时在核内聚集。Western blot结果显示Hsp90抑制剂可以同时降低Chk1和Chk2的磷酸化水平，降低由LDM诱导的ATM磷酸化水平与ATR相互结合共同发挥作用的ATRIP水平。
从以上实验结果分析可以得出以下结论：Hsp90抑制剂可以通过增强LDM诱导的DNA断裂提高细胞对LDM的敏感性；根据文献报道，单独ATM或ATR一种激酶缺失的细胞与野生型细胞相比对LDM的敏感性没有变化，Chk1和Chk2都可以被激活；但ATM和ATR双缺失的细胞对LDM的敏感性大大增加，存活细胞减少，Chk1和Chk2的磷酸化水平明显降低，结合Western blot结果，Hsp90抑制剂的加入降低了与DNA损伤后修复相关激酶的活性，同时抑制Chk1和Chk2的磷酸化水平；推断Hsp90抑制剂同时抑制ATM／ATR两条通路的激活，这种效应可能是通过抑制ATM、与ATR相结合的ATRIP和BRCA1水平实现的。综上所述，Hsp90抑制剂可以通过抑制DNA损伤后修复机制增强LDM对SKOV3细胞的杀伤作用。
从以上实验结果分析可以得出以下结论：Hsp90抑制剂可以通过增强LDM诱导的DNA断裂提高细胞对LDM的敏感性；根据文献报道，单独ATM或ATR一种激酶缺失的细胞与野生型细胞相比对LDM的敏感性没有变化，Chk1和Chk2都可以被激活；但ATM和ATR双缺失的细胞对LDM的敏感性大大增加，存活细胞减少，Chk1和Chk2的磷酸化水平明显降低，结合Western blot结果，Hsp90抑制剂的加入降低了与DNA损伤后修复相关激酶的活性，同时抑制Chk1和Chk2的磷酸化水平；推断Hsp90抑制剂同时抑制ATM／ATR两条通路的激活，这种效应可能是通过抑制ATM、与ATR相结合的ATRIP和BRCA1水平实现的。综上所述，Hsp90抑制剂可以通过抑制DNA损伤后修复机制增强LDM对SKOV3细胞的杀伤作用。