【摘 要】
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首先从绿色气球菌当中得到乳酸氧化酶(LOD)的基因,再将LOD的基因克隆到表达载体pET-28a(+)上,构建得到重组菌 BL21(DE3)/pET-LOD；再采用Overlap PCR的方法,对透明颤菌血红蛋白(Vhb)基因和LOD 基因进行融合,分别在LOD的N 端和C 端对Vhb 进行融合,构建得到两株重组菌:E. coli BL21(DE3)/pET-hVb-LOD 与E. coli BL
【机 构】
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北京科技大学环境工程系,北京 100083 北京科技大学生物科学与技术系,北京 100083 北京
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首先从绿色气球菌当中得到乳酸氧化酶(LOD)的基因,再将LOD的基因克隆到表达载体pET-28a(+)上,构建得到重组菌 BL21(DE3)/pET-LOD；再采用Overlap PCR的方法,对透明颤菌血红蛋白(Vhb)基因和LOD 基因进行融合,分别在LOD的N 端和C 端对Vhb 进行融合,构建得到两株重组菌:E. coli BL21(DE3)/pET-hVb-LOD 与E. coli BL21(DE3)/pET-LOD-Vhb,并最终在表达载体pET-28a(+)上表达得到融合蛋白Vhb-LOD 与LOD-Vhb,从而在分子水平上提高重组菌催化过程中O2的输送和利用效率。实验结果通过SDS-PAGE以及酶活分析,证实原始蛋白LOD、融合蛋白Vhb-LOD 与LOD-Vhb 均得到得到良好表达。研究发现，融合蛋白Vhb-LOD的表达可以促进重组菌的生长,提高了重组菌BL21(DE3)/pET-Vhb-LOD催化乳酸的能力,最终有利于丙酮酸的积累,说明Vhb的融合蛋白策略确实可以提高需氧酶LOD的催化效率；但融合蛋白LOD-Vhb 则未表现出LOD的催化活性,推测可能是在融合蛋白中,Vhb在空间上阻碍了LOD活性中心与乳酸的接触,从而影响了催化反应的进行。
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