论文部分内容阅读
目的:探讨中药温郁金提取物榄香烯对平滑肌细胞的影响及作用机理,研究榄香烯脂质体涂层的理化性质、缓释作用、对细胞的影响及对支架植入后再内皮化的影响[1].方法:贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,并鉴定;再用榄香烯处理平滑肌细胞,分析对细胞增殖、迁移、周期、凋亡的影响;Fluo-3/AM 荧光探针标记细胞内游离Ca2+,激光扫描共聚焦显微镜分析榄香烯对Ca2+水平的影响;IncRNA 芯片分析在力学拉伸后,榄香烯对平滑肌细胞增殖相关基因和PCNA、P53、Cx43 蛋白的表达的影响;用乙醇注入法制备榄香烯脂质体,再用静电电喷制备榄香烯脂质体涂层并进行表征,然后将其与平滑肌细胞共培养,分析对细胞增殖的影响,最后将榄香烯洗脱支架植入兔髂动脉内观察再内皮化的效果.结果:当榄香烯浓度大于12.5 μg/mL 时,显著抑制平滑肌细胞的增殖和迁移,阻滞于S/G2 期,促进凋亡,且作用具有剂量和时间依赖性.榄香烯作用后,平滑肌细胞的铺展面积减小、胞间连接被打断、核质皱缩,形态狎长.当浓度大于50-100 μg/mL 时,细胞表现出毒性.榄香烯引起胞内游离Ca2+浓度先升高约1 倍然后恢复正常水平.力学拉伸用榄香烯处理的平滑肌细胞,在基因表达谱中有1417 个基因表达差异在2 倍以上,涉及PPAR、MAPK、Akt、Erk1/2 等约34 个信号通路,促进P53 的表达,抑制PCNA 和Cx43 的表达.榄香烯脂质体的粒径大小和Zeta 电位分别为115.6±2.1 nm 和-18.6±1.5 mV.榄香烯脂质体电喷薄膜具有较好的缓释效果.将榄香烯脂质体电喷膜与平滑肌细胞共培养24 h 后,显著抑制细胞在其表面的增殖,阻滞细胞周期.制备榄香烯脂质体涂层均匀的药物洗脱支架,在植入兔髂动脉后三个月内,与对照相比药物洗脱支架能显著促进支架植入部位的再内皮化.结论:榄香烯可以抑制平滑肌细胞的增殖、迁移,阻滞周期,促进凋亡,其作用涉及多种蛋白因子及信号通路.榄香烯脂质体具有缓释效果、抑制平滑肌细胞的增殖,促进支架植入部位内皮化的作用.本研究为榄香烯作为支架涂层药物在心血管介入治疗领域的应用提供了实验依据.