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铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)是院内感染重要条件致病菌之一,外科重症监护室是院内感染重灾区,为探讨铜绿假单胞菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素耐药机制,选择2001年7月至2004年7月,北京大学第一医院外科监护室各种临床标本中分离的49株非重复Pa,用琼脂稀释法测定抗生素最小抑菌浓度;提取β-内酰胺酶进行三维水解试验及等电聚焦电泳;紫外分光光度计测定酶活性;用PCR扩增IMP、VIM金属酶基因;用Western-blot分析外膜蛋白0prD<,2>表达水平。结果发现受检49株Pa均对4种或4种以上抗生素耐药,表现为多重耐药,将Pa对亚胺培南MIC≥8μg/mL,归为耐药组,MIC≤4μg/mL归为敏感组,则8株对亚胺培南敏感,41株对亚胺培南耐药。耐药组34株菌产AmpC酶,其中8株同时产ESBLs酶,2株单一产ESBLs,未筛选出产金属酶菌株;以参照菌PaO1酶活性(0.043umol/min.mg)为参考,耐药组除Pa8、Pa10、pa40、Pa414株菌菌酶活性在PaO1的5倍以下,其余菌株酶活性均在PaO1的10倍以上;敏感组酶活性除Pa42外,酶活性均是PaO1的5倍以下,亚胺培南耐药组酶活性(74.32±53.42)与亚胺培南敏感组酶活性(8.7±16.16)比较差异有统计学意义(P=0.001<0.01);等电点从5.4~9.3不等。为使各菌株间外膜蛋白具有可比性,外膜孔蛋白OprD<,2>的表达水平以各菌株整合密度值(IDV)与参照菌PaO1相对应值的比表示,比值<1.0为OprD<,2>低表达株,>1.0为正常表达株,缺失株OprD<,2>值以0表示。发现对亚胺培南敏感组均正常表达OprD<,2>,耐药组OprD<,2>表达均降低或缺失(23株OprD<,2>缺失,18株降低)。OprD<,2>相对表达量(0.20±0.27)与敏感组(3.10±2.20)比较差异有统计学意义(P=0.000<0.01);未扩增出IMP、VIM金属酶基因。由此可见外膜蛋白OprD<,2>表达降低或缺失以及高活性AmpC酶是本院外科监护室铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,与IMP、VIM金属酶关系不大。