【摘 要】
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[目的]利用胚胎干细胞测试(embryonic stem cell test,EST)模型,研究全氟烷基化合物全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane Sulfonate,PFOS)对小鼠胚胎干细胞(Mouse Embryonic St
【机 构】
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浙江大学药理毒理研究所,杭州310058
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
论文部分内容阅读
[目的]利用胚胎干细胞测试(embryonic stem cell test,EST)模型,研究全氟烷基化合物全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane Sulfonate,PFOS)对小鼠胚胎干细胞(Mouse Embryonic Stem Cells,mESCs)衍生心肌细胞Ca2+信号的影响.[方法]：利用经典的悬滴培养法建立EST模型,以DMSO作为溶剂对照组,实验组加入40 μM的PFOS.将分化d 5+5的拟胚体(Emobryonic Bodys,EBs)在显微镜下用无菌手术刀切下跳动的细胞区域,由此得到纯化的心肌细胞用Accutase酶消化成单个细胞,进而采用具有高亲和力的Ca2+指示剂Flour-4 AM染色用以测定心肌细胞内钙离子浓度[Ca2+]i.同时,一部分纯化得到的心肌细胞按适宜的密度种于载有盖玻片的培养皿中继续培养36小时后,负载Flour-4 AM染料,采用咖啡因刺激,并在荧光倒置显微镜下检测其刺激引发的钙瞬变,考察PFOS对mESCs衍生化心肌细胞胞内钙离子浓度及钙瞬变的影响.此外,Western-blot法考察PFOS作用后mESCs衍生化心肌细胞的兰尼碱受体2(Ryanodine receptor, RYR2)的表达水平.[结果]：PFOS作用后,mESCs细胞衍生心肌细胞内[Ca2+]i较溶剂对照组显著性降低,其浓度为53±23nmol/L,约为溶剂对照组307±25 nmol/L的1/6倍,提示PFOS可降低mESCs细胞衍生心肌细胞内钙离子浓度.荧光倒置显微镜结果显示,PFOS组心肌细胞加入咖啡因后,钙振荡的斜率较溶剂对照组显著降低,且振幅较溶剂对照组显著下降,提示PFOS降低咖啡因刺激引发的钙瞬变.Western-blot结果显示,两组mESCs细胞衍生心肌细胞中RyR2蛋白表达水平无明显差异.[结论]：PFOS可降低mESCs细胞衍生心肌细胞内钙离子浓度及降低咖啡因刺激引发的钙瞬变,但不改变RyR2通道蛋白表达,可能通过抑制RyR活性进而影响钙瞬变.
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