【摘 要】
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(目的)Nsp2 是位于PRRSV ORF1a 的一个多结构域蛋白,具有较高的变异性,其氨基端和羧基端高度保守,中间区域富含脯氨酸,是病毒复制的非必须区和遗传变异的主要区域,也是同
【机 构】
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山东农业大学动物科技学院,泰安 271018
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十一次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十次学术研讨会
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(目的)Nsp2 是位于PRRSV ORF1a 的一个多结构域蛋白,具有较高的变异性,其氨基端和羧基端高度保守,中间区域富含脯氨酸,是病毒复制的非必须区和遗传变异的主要区域,也是同型病毒不同毒株的主要区别部位.前期研究的基础发现,Nsp2 全长蛋白体外过表达后能发生聚集形成聚合体aggresome.Aggresome 作为病毒蛋白聚集场所和形式,为病毒复制和装配提供丰富物质基础,同时能避免免疫系统的识别而不被降解.鉴于聚合体在病毒感染过程中有重要作用,本研究拟寻找与Nsp2 形成聚集体有关的区域.(方法)根据本实验室的研究结果及Nsp2 的结构特点(一个半胱氨酸酶活性的结构域,一个高变区,跨膜区及羧基端尾巴),分别设计4对引物进行克隆入带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的真核表达载体,经序列测定进行鉴定,同时转染细胞用Western-blot 对表达蛋白进行鉴定.将构建的带有GFP 标签的重组质粒转染PRRSV 易感细胞Marc-145,非易感细胞293T等细胞,用共聚焦显微镜观察表达的NSP2 蛋白形成aggresome 情况.(结论)目前结果表明跨膜区及羧基端尾巴与aggresome 形成有关.该研究结果为疫苗和药物设计提供新的思路和方法.
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