【摘 要】
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目的 筛选人锌转运体8(zinc transporter 8,ZnT8)中强免疫原性片段,并对其进行克隆表达及鉴定。方法 采用生物信息学软件预测ZnT8结构特征,筛选出具有强免疫原性的N末端
【机 构】
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400038重庆,第三军医大学西南医院内分泌代谢科
【出 处】
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中华医学会第九次全国内分泌学学术会议
论文部分内容阅读
目的 筛选人锌转运体8(zinc transporter 8,ZnT8)中强免疫原性片段,并对其进行克隆表达及鉴定。方法 采用生物信息学软件预测ZnT8结构特征,筛选出具有强免疫原性的N末端片段ZnT8(N),经PCR(Polymerase Chain Reaction)技术扩增,构建表达质粒pE132a-ZnT8 (N),转化入E coli BL21(DE3)中,IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导目的蛋白的表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析及Western印迹鉴定。结果 从ZnT8分子中筛选出具有140个氨基酸的肽段ZnT8(N),重组质粒pET32 a-ZnT8 (N)经酶切和测序鉴定证实构建成功。转入大肠杆菌进行表达,表达产物相对分子质量(Mr)约32 000,与预期值相符,并经免疫印迹检测鉴定为阳性,融合蛋白的表达量约占菌体蛋白总量45％。结论 筛选获得了人胰岛细胞来源的ZnT8强免疫原性片段,并在原核系统中成功表达。
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