【摘 要】
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目的 建立大鼠星形胶质细胞(astrocyte,AST)体外培养划伤模型.方法 取新生1-2 d Wistar大鼠皮层进行AST原代培养,约10天后传代,传代培养至10天左右,用胶质纤维酸性蛋白(G
【机 构】
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首都医科大学北京市神经外科研究所,北京100050
【出 处】
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中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议(The 7th Biennial Meeting and the
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目的 建立大鼠星形胶质细胞(astrocyte,AST)体外培养划伤模型.方法 取新生1-2 d Wistar大鼠皮层进行AST原代培养,约10天后传代,传代培养至10天左右,用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色检测鉴定AST的纯度,并用白色无菌Tips头进行划伤实验.在六孔培养板中呈“＃”字划伤,划痕线之间的平行间距为0.5厘米.分别于划伤前1小时、划伤后1、3、6、12、24小时在倒置相差显微镜下观察对照组和实验组细胞形态的变化,并取其培养上清0.1毫升进行LDH活性测定；划伤后24小时取培养细胞按照Bradford法进行蛋白测定.结果 (1) GFAP免疫组化证实培养细胞中AST达95％以上.(2)显微镜下观察对照组细胞在实验24小时内其形态没有变化.实验组在划伤当时及划伤后1、3小时,划痕两侧边缘整齐,部分细胞形态由扁平形变为不规则形,部分细胞结构不完整；划伤后6小时划痕两侧开始出现细胞突起向划痕区延伸；划伤后12、24小时向划痕区延伸的细胞突起增多,且划痕区出现AST生长；划伤后3天AST基本铺满划痕区.(3)对照组(n=9)在实验各时间点的LDH/pro值分别为41.16±4.9、43.10±4.66、44.68±550、47.88±5.85、52.62±5.59和57.77+5.87 (U/mg),说明对照组LDH漏出在3小时内缓慢增加(P＞0.05),但在6小时后增加明显(P＜0.05).
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