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背景 由于临床低传代病毒株分离率低,传代次数受到限制,在大量HCMV的基础研究中,多选取实验室病毒株为研究对象.但实验室病毒株在体外反复传代的过程中随着部分基因的丢失,使其生物学特性发生改变,与致病的临床病毒株存在较大的差异.在研究病毒致病机制方面,实验室病毒株显示出一定的局限性.另一方面实验室病毒株无法满足对缺失基因研究的需要.研究显示,缺失部分的基因主要集中在UL/b区域,推测此区域与病毒的致病性密切相关,也是HCMv致病机制研究的焦点. 目的 为研究人巨细胞病毒临床病毒株UL/b区域UL148基因功能,设计DNA性质EGS在体外抑制UL148基因的表达.方法 应用RNA structure技术模拟UL148 RNA二级结构,选择二级结构相对简单的区域设计EGS.应用PCR的方法分别扩增UL148及M1RNA基因,克隆至T7启动子下游,在T7 RNA聚合酶的作用下,体外转录UL148RNA及M1RNA,其中UL148以32P标记进行体外转录.在切割反应液中,混合EGS、M1RNA,反应1小时后,进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,Typhoon扫描仪观察结果. 结果 根据UL148 RNA二级结构选取第58-72位碱基作为EGS结合区域,其切割位点位于57位,针对此区域设计EGS57,并在体外进行EGS57：UL148 RNA结合的二级结构的模拟,可形成M1RNA天然作用底物类似的径环结构.在T7 RNA聚合酶的作用下,分别在体外转录M1RNA及UL148 RNA,其大小均与预期相符.经切割反应,可获得与预期切割位点相符的切割条带.结论 EGS57可高效切割UL148 RNA,其切割位点准确,与预期相符.该研究可为进一步探讨UL148基因功能提供有效基因沉默工具,也为明确HCMV基因功能奠定基础.