与ToMV CP互作的烟草IP-L蛋白原核表达及抗血清制备

来源 :中国植物病理学会2011年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:geng20516136
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植物病毒侵染寄主的过程非常复杂,而主要导致寄主致病的能力取决于病毒蛋白与寄主因子之间的相互作用。已有许多研究发现植物寄主因子能与植物病毒基因编码产物(包括外壳蛋白、运动蛋白、复制相关蛋白)相互作用。利用酵母双杂交系统筛选到1个与番茄花叶病毒(ToMV)外壳蛋白(CP)相互作用的烟草蛋白,并命名为IP-L。进一步利用酵母双杂交和GST-Pulldown实验对IP-L和ToMV CP上二者相互作用位点进行了研究,结果发现IP-L N端的α-螺旋区域(1~20位氨基酸)和ToMV CP中的2个α-螺旋区域(16~31位氨基酸、138~149位氨基酸)为二者的相互作用所必需。目前对IP-L与病毒的蛋白的相互作用主要集中在对二者相互作用位点以及在细胞中的定位的研究,而对病毒侵染寄主后,寄主蛋白在植物体内的表达情况知之甚少。本实验根据GenBank上已报道的IP-L全长序列设计特异性引物,从实验室自己种植的普通烟中扩增得到长度465bp的片段,与预期的结果相符。将目的片段与质粒pEGX-6p-l连接,构建了包含基因的原核表达载体pEGX-IP-L,并导入大肠杆菌BL21中。在37℃培养、1.0mmol/LIPTG诱导条件下表达出融合蛋白GST IP-L,SDS-PAGE电泳检测分析表明成功表达出分子质量约为42kDa的目的融合蛋白GST-IP-L。以表达的融合蛋白为抗原,免疫家兔,制备的抗血清的效价为1/6400。用获得抗体进行westemblot分析表明该血清具有良好的特异性,可用于检测病毒侵染寄主后,寄主蛋白在植物体内的表达情况。
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