【摘 要】
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TFⅡB是决定基因转录起始的重要因子,参与转录起始复合物的形成,在卵母细胞成熟过程中集中分布在减数分裂纺锤体上,而α-tubulin是组成纺锤体的主要微管蛋白.为了研究小鼠卵母细胞成熟过程中转录因子TFⅡB与α-tubulin的动力学变化,本实验首先使用微管特异性药物秋水酰胺处理MⅡ期的小鼠卵母细胞,结果发现,纺锤体结构的变化并未引起TFⅡB与其相对位置的改变;之后分别克隆得到小鼠tf2b与tub
【机 构】
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内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室 呼和浩特市 010021
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TFⅡB是决定基因转录起始的重要因子,参与转录起始复合物的形成,在卵母细胞成熟过程中集中分布在减数分裂纺锤体上,而α-tubulin是组成纺锤体的主要微管蛋白.为了研究小鼠卵母细胞成熟过程中转录因子TFⅡB与α-tubulin的动力学变化,本实验首先使用微管特异性药物秋水酰胺处理MⅡ期的小鼠卵母细胞,结果发现,纺锤体结构的变化并未引起TFⅡB与其相对位置的改变;之后分别克隆得到小鼠tf2b与tubulin-1α基因的CDS全序列,成功构建了双分子荧光互补(BimolecularFluorescence Complementation,BiFC)表达载体pHA-tf2b和pFlag-tuba1α,经过对小鼠胎儿成纤维细胞进行共转染发现,TFⅡB与α-tubulin之间确实存在结构或位置上的相互作用用.为了进一步研究TFⅡB对卵母细胞成熟的影响,我们向GV期小鼠卵母细胞质中注射了tf2b的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),对TFⅡB的表达进行干扰.实时定量RT-PCR(Real Time RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(westernblot)检测结果显示,在注射siRNA 6h后,tf2b的mRNA开始减少,并且siRNA注射组中TFⅡB蛋白的表达量显著低于对照组.但是与对照组相比,TFⅡB表达量的下降不会引起成熟率的显著降低(P＞0.05).
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