论文部分内容阅读
[目的]无机砷是环境中广泛的存在有毒有害物质.最近研究显示砷暴露与成年人的认知改变相关.在神经变性疾病中小胶质细胞炎性活化是一个早期信号,当它发生过度激活,会加剧脑内的炎症反应,影响认知功能.本研究中,我们探讨三氧化二砷在诱导小胶质细胞炎症活化中的作用.[材料和方法]采用HAPI小胶质细胞研究三氧化二砷诱导小胶质细胞炎性激活及其信号通路. (1)利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测不同浓度三氧化二砷诱导HAPI细胞和同一浓度三氧化二砷暴露不同时间后,HAPI细胞IL-6的分泌水平改变. (2)利用Western blot检测不同浓度三氧化二砷(0,0.5,2,5,8,10,20 nmol/mL)和刺激不同时间(0,1,3,6,12,24,48 h)引起的HAPI细胞的总蛋白中AKT,P-AKT的蛋白水平变化.(3)利用Western blot检测不同浓度三氧化二砷处理后HAPI细胞的总蛋白中iκbα,P-iκbα,P-p65,p65的蛋白水平变化.并用细胞免疫荧光检测在三氧化二砷刺激下p65进入细胞核情况.(4)使用AKT抑制剂LY294002预先处理2小时后用三氧化二砷刺激再对上述指标进行进一步检测.[结果]三氧化二砷刺激HAPI细胞后与对照组相比IL-6在细胞培养液中的分泌量增加,在5nmol/mL三氧化二砷时IL-6的分泌量达到最高值.HAPI细胞暴露于5nmol/mL三氧化二砷暴露不同的时间与对照相比IL-6的分泌增加,24h达到最大,48h基本不再改变.三氧化二砷刺激小胶质细胞HAPI后与对照相比,p-AKT(尤其是在浓度5,8 nmol/mL),p-iκbα(尤其是在浓度0.5,2,5 nmol/mL),p-p65(尤其是在浓度0.5,2,8nmol/mL)表达增加,细胞总蛋白中iκbα量随着三氧化二砷浓度的增加而降低,AKT/NF-κB通路被激活.加入AKT抑制剂LY294002预处理2h后,5nmol/mL三氧化二砷诱导的HAPI细胞IL-6的分泌增加被抑制,p-AKT,p-iκbα,p-p65表达升高被抑制,iκbα降解被抑制,AKT/NF-κB通路被抑制. [结论]三氧化二砷可通过激活AKT/NF-κB通路诱导小胶质细胞炎性激活.