【摘 要】
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应用不同引物将PRRSBJ-4毒株ORF5缺失信号肽的dE基因及其缺失突变体dEM分别克隆至原核高效表达载体pGEX-6P-1中,获得重组质粒pGEX-6P-dE、pGEX-6P-dEM,转化大肠杆菌BL21细胞,经诱导获得重组融合蛋白(GST-dE,GST-dEM),表达量分别为16％,32％.分别经包涵体变性、复性,GST亲和层析、凝胶层析等获得纯化的重组蛋白GST-dEM、GST-dE.应用
【机 构】
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中国农业大学农业部预防兽医学重点实验室,北京,100094;天津大学农业与生物工程学院,天津,300072
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次学术研讨会
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应用不同引物将PRRSBJ-4毒株ORF5缺失信号肽的dE基因及其缺失突变体dEM分别克隆至原核高效表达载体pGEX-6P-1中,获得重组质粒pGEX-6P-dE、pGEX-6P-dEM,转化大肠杆菌BL21细胞,经诱导获得重组融合蛋白(GST-dE,GST-dEM),表达量分别为16％,32％.分别经包涵体变性、复性,GST亲和层析、凝胶层析等获得纯化的重组蛋白GST-dEM、GST-dE.应用圆二色谱(CD)测定纯化的GST-dE,GST-dEM蛋白,计算相应的二级结构组成,结合生物信息学分析,绘制出GP5蛋白的二级结构图.分析结果表明,PRRSVGP5重组蛋白α螺旋、β折叠、转角、无规则卷曲分别为58aa,56aa,14aa和72aa,进一步从结构的角度分析了PRRSVGP5蛋白结构与其功能的关系。
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