【摘 要】
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滩羊是我国珍贵的裘皮用绵羊品种之一,以产优质的二毛裘皮而享誉中外.另外,滩羊肉也是滩羊的重要产品之一,以其肉质细嫩、无膻腥味、脂肪分布均匀、含脂率低和营养丰富等
【机 构】
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中国农业大学动物科学技术学院,动物营养学国家重点实验室,北京100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会
论文部分内容阅读
滩羊是我国珍贵的裘皮用绵羊品种之一,以产优质的二毛裘皮而享誉中外.另外,滩羊肉也是滩羊的重要产品之一,以其肉质细嫩、无膻腥味、脂肪分布均匀、含脂率低和营养丰富等特性成为羊肉中的精品.构建滩羊cDNA文库不仅有利于保存滩羊的基因资源,而且对滩羊特异基因的克隆、表达以及新基因的筛选和功能研究均具有重要作用.肝脏作为动物体内最重要的器官之一,在消化、吸收、排泄等机体代谢过程以及生物转化中均起着非常重要的作用,它是多种重要信息调控分子和机体生理生化反应的中心,也是机体最主要的生物合成器官.因此,构建滩羊肝脏cDNA文库对于滩羊遗传资源的保护及其基因功能的研究具有重要的意义.本试验以宁夏滩羊为研究对象,以其肝脏组织为试验材料,构建了滩羊肝脏组织cDNA文库.试验选取宁夏农垦暖泉羊场健康无病的4月龄滩羊公羊,单栏饲养,自由饮水,饲养4个月后屠宰动物取其肝脏组织.首先使用Trizol试剂提取其肝脏组织总RNA,然后利用mRNA纯化试剂盒纯化出Poly (A)+ RNA,将约4.0μg的mRNA利用反转录酶M-MLV和Oligo (dT)18锚定引物合成cDNA；使用T4 DNA聚合酶将双链cDNA末端平滑化后与EcoR Ⅰ接头连接,随后使用NotⅠ进行酶切；利用离心吸附柱去除400bp以下的短片段cDNA,然后将其克隆至pGADT7载体上,再利用电刺激转化法将其导入大肠杆菌；初级文库构建完成后进行100万倍扩增放大并提取文库质粒.结果提示本试验所构建的滩羊肝脏cDNA文库初级库容约1.5×106cfu,初级文库甘油菌保存液滴度为3.8×10％fu/1.8m1,插入片段平均长度为1kb,重组率为87.5％,最终得到文库质粒约3.6mg.结果表明,本试验成功构建了滩羊肝脏cDNA文库.
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