【摘 要】
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作为专性体表寄生虫,蜱以吸血宿主血液为生,在其吸血过程中可传播多种病原体；唾液腺是宿主血液进入蜱体内最先接触的组织器官,也是蜱体内病原体传播入宿主体内的通道。随着吸血过程的完成,唾液腺逐渐萎缩,这一现象是由细胞凋亡引起的,但其分子机制尚不清楚。本研究探索了半胱氨酸蛋白酶在唾液腺凋亡中的作用机制。通过Tunnel染色和AnnexinV细胞凋亡流式检测确定了成蜱吸血过程中唾液腺细胞凋亡的变化过程,结果
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作为专性体表寄生虫,蜱以吸血宿主血液为生,在其吸血过程中可传播多种病原体；唾液腺是宿主血液进入蜱体内最先接触的组织器官,也是蜱体内病原体传播入宿主体内的通道。随着吸血过程的完成,唾液腺逐渐萎缩,这一现象是由细胞凋亡引起的,但其分子机制尚不清楚。本研究探索了半胱氨酸蛋白酶在唾液腺凋亡中的作用机制。通过Tunnel染色和AnnexinV细胞凋亡流式检测确定了成蜱吸血过程中唾液腺细胞凋亡的变化过程,结果表明进入快速吸血期前(上体3～4天)是唾液腺细胞诱导细胞凋亡发生的主要时相,随后随着吸血过程快速完成,唾液腺细胞逐渐坏死。通过唾液腺转录组测序及基因克隆和重测序鉴定,共获得6种半胱氨酸蛋白酶,分别为 CathepsinB(CATB),Cathepsin L(CATL),Caspase-1(CASP1),Caspase-8(CASP8),Autophagy-related protease 4B(ATG4B),Autophagy-related protease 4D(ATG4D)。其中caspase-1作为效应性半胱天冬氨酸蛋白酶,在上体后5到7天表达量逐渐增加。利用显微注射技术将体外合成的双链Caspase-1干扰RNA注射入镰形扇头蜱成蜱体内,24小时后接种新西兰大白兔,分别对上体后1到7天的对照组与实验组成蜱唾液腺进行分离观察,在mRNA和蛋白水平上检测7天吸血过程中半胱氨酸蛋白酶的动态变化,利用Tunnel细胞凋亡染色和Annexin V细胞凋亡检测技术对吸血过程中唾液腺的变化进行监测,结果显示caspase-1的干扰可明显抑制唾液腺细胞的凋亡,影响吸血过程中唾液腺细胞的坏死,并且诱导ATG4D的表达量逐渐增加,表明ATG4D与caspase-1之间可能具有密不可分的调节作用,也暗示了自噬蛋白酶可能参与唾液腺的凋亡。
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