【摘 要】
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目的 观察小檗碱(Neutral sulfate Berberine,Ber)协同表柔比星(Epirubicin,Epi)促T24膀胱癌细胞凋亡的作用,并进一步探讨其机制.方法 培养T24膀胱癌细胞株,观察不同剂量、不同时间点Ber对Epi处理后T24细胞的活力变化,用细胞毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)测定各组细胞活力.观察Ber对Epi处理后T24细胞凋亡的
【机 构】
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暨南大学附属第一医院泌尿外科,广东 广州 510632
【出 处】
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CUA2015全国泌尿男生殖系统肿瘤专题会议(10th)暨2015年广东省医学会泌尿外科学学术年会
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目的 观察小檗碱(Neutral sulfate Berberine,Ber)协同表柔比星(Epirubicin,Epi)促T24膀胱癌细胞凋亡的作用,并进一步探讨其机制.方法 培养T24膀胱癌细胞株,观察不同剂量、不同时间点Ber对Epi处理后T24细胞的活力变化,用细胞毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)测定各组细胞活力.观察Ber对Epi处理后T24细胞凋亡的影响,采用Hoechst染色观察T24细胞形态学改变,同时用Western-blot检测凋亡蛋白Caspase-3蛋白、蛋白水解酶(Caspase)家族成员Caspase-9及Bcl-2家族中Bcl-2和Bax的蛋白表达情况.结果 细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定Con组、Ber组、Ber+Epi合用组及Epi组T24细胞活力.加药后24h,Ber(0.5μmol/L)+Epi、Ber(1.0μmol/L)+Epi、Ber(2.0μmol/L)+Epi各合用组的细胞抑制率均显著高于Epi单用组(p＜0.01)；而Ber(0.5μmol/L)+Epi、Ber(1.0μmol/L)+Epi、Ber(2.0μmol/L)+Epi各合用组各组间OD值相比无明显统计学意义(P＞0.05).加药后48h,Ber(0.5μmol/L)+Epi、Ber(1.0μmol/L)+Epi、Ber(2.0μmol/L)+Epi各合用组的细胞抑制率均显著高于Epi单用组(p＜0.01)；而Ber(0.5μmol/L)+Epi、Ber(1.0μmol/L)+Epi、Ber(2.0μmol/L)+Epi各合用组组间OD值相比也无明显统计学意义(P＞0.05).Hoechst染色荧光倒置显微镜下显示,Ber+Epi合用组与Epi单用组相比,T24细胞核碎裂、核固缩现象更加明显,细胞数量大量减少.Western-blot检测各组T24细胞中Caspase-3蛋白水平变化,Ber单用组与对照组比较,表达增加(p＜0.05),Epi单用组与Ber单用组比较,表达显著增加(p＜0.01),Ber+Epi合用组与Epi单用组比较,表达显著增加(p＜0.01).Ber和/或Epi处理T24细胞24h,Ber+Epi合用组与Epi单用组比较,Caspase-9、Bax蛋白的表达显著增加(p＜0.01)；而Bcl-2蛋白的表达明显减弱(p＜0.05).结论B er能协同Epi诱导人T24细胞凋亡,其作用机制可能与小檗碱促进Bax蛋白的表达、抑制Bcl-2蛋白的表达,启动内源性凋亡通路有关.
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