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目的:构建人uPA17-KPI基因及其真核表达载体在毕赤酵母中获得高效表达并进行活性鉴定。
方法:构建真核表达载体pPICZa/uPA17-KPI,经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X-33。用PCR法筛选转染阳性克隆,SDS-PAGE法鉴定培养上清液中的uPA17-KPI的表达,筛选高表达工程菌,进行活性测定。
结果:真核表达载体pPICZa/uPA17-KPI序列与Gene Bank登录的cDNA序列一致。pPICZa/uPA17-KPI真核表达载体经电转化获得阳性克隆。SDS-PAGE分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有uPA17-KPI蛋白并具有胰蛋白酶的抑制活性。
结论:获得uPA17-KPI基因及其真核表达载体以及高表达、高活性的uPA17-KPI毕赤酵母工程菌。