论文部分内容阅读
人乳低聚糖具有抗病毒感染，增强免疫力，减少炎症等生理作用，对其合成的研究具有现实意义。岩藻低聚糖是人乳低聚糖的一种，可以在体外通过己糖激酶、磷酸甘露糖变位酶、GDP-甘露糖4,6脱水酶、α1,2-岩藻糖基转移酶等酶的作用下进行合成。
磷酸甘露糖变位酶(manB)是甘露糖合成人乳低聚糖代谢途径中的一个关键酶。因此，为大量获得磷酸甘露糖变位酶这个关键酶，采用PCR法从E.coli K12的基因组中扩增目的基因，并将其连接到原核表达载体Pet-22b(+)中，得到重组质粒Pet-manB，转化入大肠杆菌BL21(DE3)，构建基因工程菌BL21/Pet-manB重组基因工程菌。IPTG诱导诱导重组蛋白的表达，表达产物经Sds-PAGE进行分析。PCR和测序结果表明成功扩增出磷酸甘露糖变位酶基因，大小为1371bp，SDS-PAGE结果表明己糖激酶在大肠杆菌BL21中实现表达。