【摘 要】
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目的：1、探讨拮抗A2AR表达对小胶质细胞OGD/R后其活化增殖情况的影响.2、探讨A2AR对小胶质细胞OGD/R的炎症因子TNF-α基因表达的影响.方法：采用购买的小鼠小胶质细胞,进行细胞传代,取培养3-5代的细胞实验,细胞培养至60％～70％时,进行体外氧糖剥夺后复氧复糖模型(OGD/R)模拟小胶质细胞在体内缺血缺氧状态,分别缺氧缺糖4h、8h、12h后复氧复糖12h,O组(OGD)只缺氧缺糖
【机 构】
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温州医科大学附属第二医院康复医学科 325027
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
论文部分内容阅读
目的：1、探讨拮抗A2AR表达对小胶质细胞OGD/R后其活化增殖情况的影响.2、探讨A2AR对小胶质细胞OGD/R的炎症因子TNF-α基因表达的影响.方法：采用购买的小鼠小胶质细胞,进行细胞传代,取培养3-5代的细胞实验,细胞培养至60％～70％时,进行体外氧糖剥夺后复氧复糖模型(OGD/R)模拟小胶质细胞在体内缺血缺氧状态,分别缺氧缺糖4h、8h、12h后复氧复糖12h,O组(OGD)只缺氧缺糖,M组(OGD/R,Model)缺氧缺糖后复氧复糖12小时,并设相应对照C组(Control),模型前加入经过缺氧预处理的无糖1640及A2AR拮抗剂SCH58261,倒置显微镜下观察细胞形态的改变,细胞爬片后免疫荧光标记Iba-1后荧光显微镜下观察细胞,取出细胞后提取RNA测定A2AR及TNF-αmRNA的表达.结果:1、倒置显微镜下观察小胶质细胞:0组小胶质细胞突触回缩，细胞变圆、变大，成为阿米巴样活化的小胶质细胞，08h组表现最为明显。而024h组细胞出现结构模糊、胞体肿胀、胞浆水肿，不同程度的核深染、细胞核皱缩。这些表现在M组表现较O组不明显。2,MTT观察OGD或OGD/R小胶质细胞的活力:O组小胶质细胞的活力在不同时间点与C组间差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。而M组较C组差异无统计学意义(P>0.05)。3、荧光显微镜下Iba-1的表达:荧光下Iba-1显红光，因其表达在胞浆内，能清楚显示细胞形态，M组与倒置显微镜下类似，存在个别活化的小胶质细胞，尚不能区分OGD/R后小胶质细胞活化情况。4、小胶质细胞中A2AR:mRNA的表达:随着时间的变化，A2AR表达在M与C组之间差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)，在M4h,M8h组表达增高，而在M12h组表达降低。MC组与MS组之间，A2AR mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。5、小胶质细胞中TNF-a mRNA的表达:M各组不同时间点TNF-a mRNA的表达增加，其表达与C组差异有统计学意义(P<0.01 P<0.05)，并在MCBh组表达最明显(P<0.01).MC组与MS组之间，MS表达较MC组减少，差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1、小胶质细胞在OGD后8h细胞活化明显，而OGD/R后8h活化不明显，提示在体外经过缺氧缺糖8h，小胶质细:胞活化达高峰，而复氧后其有一定的恢复。2、A2AR随着OGD/R的不同时间点表达不同，而拮抗剂对其表达影响无明显，提示A2AR的表达受缺氧缺糖环境影响，而拮抗其受体不影响其在基因水平的表达。3、A2AR拮抗可减少小胶质细胞OGD/R后下NF-a mRNA的表达，提示A2AR拮抗后通过下调小胶质细胞活化后的炎症反应而起到抑制脑组织进一步损伤，从而促进其神经功能恢复的作用。
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