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报告摘要：肝细胞癌是世界范围内严重危害人类生命和健康的疾病,在我国发病率和死亡率均较高.目前HBV感染是我国肝细胞癌主要的病因之一,约80％的肝细胞癌与乙肝病毒感染有关.慢性乙肝病毒(Hepatitis Bvirus,HBV)感染不仅可引起急、慢性肝炎,而且与肝硬化、肝癌的发生密切相关.HBV编码的蛋白中,乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)被认为是参与慢性乙型肝炎病理过程和诱发肝癌的最重要的蛋白质,广泛影响宿主细胞的各种生命活动,但是其诱发肝细胞癌发生的具体分子机制尚不十分清楚.RIZ1基因属于组蛋白甲基转移酶家族,是新近证实的肿瘤相关抑癌基因.研究表明RIZ1在乳腺癌、结肠癌、肺癌、神经母细胞瘤及肝癌等多种原发性肿瘤中均存在低表达的现象,且低表达与其上游启动子区高频率的甲基化有关.近期有研究发现,RIZ1在肝癌中的低表达与HBV的感染具有一定的相关性,但具体机制尚不清楚.为了探讨HBV感染相关肝细胞癌中RIZ1异常表达的机制及其与HBV感染的关系,我们构建了HBV关键基因HBx表达载体,建立了HBx转染肝细胞永生化细胞及肝癌细胞模型.通过研究发现,HBx的表达载体稳定转染下调了RIZ1的表达.为了解释HBx下调了RIZ1的表达具体机制,我们检测了HBx转染的细胞系中RIZ1启动子区DNA甲基化状态,发现HBx增加了RIZ1的甲基化水平,同时发现HBX上调了DNMT1的表达.以DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza处理HBx表达的细胞系MHCC-97H,发现5-Aza回复了RIZ1的表达.肝癌细胞系中抑制DNMT1表达会伴随RIZ1的表达回复,同时检测到RIZ1启动子区DNA甲基化状态的改变.通过染色质免疫共沉淀技术检测到DNMT1蛋白与RIZ1启动子区结合,并检测到这种结合作用在转染HBx后进一步加强.通过筛选对DNMT1调控的microRNA,检测到转染HBx可下调miR-152,miR-152的转染抑制了DNMT1的表达.免疫组化及qRT-PCR技术在肝癌临床病例中检测RIZ1低表达,发现肝癌组织中RIZ1的低表达与HBV感染相关.联合组织中HBx的表达分析,初步判定HBV相关肝癌发生过程中,HBx对抑癌基因RIZ1表达有抑制作用.肝正常永生化细胞系LO2、癌旁、癌细胞系及表达HBx的97H和HepG2.215细胞系中检测RIZ1的mRNA及蛋白表达,与临床病例结果相似,肝癌细胞系中RIZ1表达相对正常和癌旁细胞下调,并且在表达HBx的97H和HepG2.215细胞系中表达更低.以上实验结果提示：HBx抑制了RIZ1的表达,这一过程是通过HBx下调miR-152进而增强DNMT1表达,最终导致RIZ1启动子区高甲基化的表遗传调节机制来沉默其表达的.