【摘 要】
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目的:构建并筛选靶向大鼠δ阿片受体shRNA质粒.方法:根据GenBank中大鼠δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)基因序列设计并构建3个特异性干扰质粒(DOR1-3),转染至大鼠肾上
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目的:构建并筛选靶向大鼠δ阿片受体shRNA质粒.方法:根据GenBank中大鼠δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)基因序列设计并构建3个特异性干扰质粒(DOR1-3),转染至大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12中,用RT-PCR及Western blot技术检测δ阿片受体mRNA和蛋白表达情况.结果:经酶切鉴定与测序证实重组质粒构建成功,在转染PC12细胞48小时后,与空白和阴性对照组比较,质粒DOR3组DOR mRNA及蛋白表达水平明显降低,并且其对3-磷酸甘油酯脱氢酶(GAPDH)的mRNA和蛋白表达水平无显著影响,说明质粒DOR3干扰效果好且无脱靶效应.结论:成功构建并筛选出靶向大鼠DOR的shRNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒,为进一步研究DOR在吗啡耐受中的作用和机制奠定了基础.
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