【摘 要】
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目的：构建理想的再生微环境，从干细胞的选取与定向分化，组织工程新型支架、细胞培养诱导、体内植入环境的建立等关键问题入手，在体内、外构建细胞生长的理想微环境，从而一体化
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目的：构建理想的再生微环境，从干细胞的选取与定向分化，组织工程新型支架、细胞培养诱导、体内植入环境的建立等关键问题入手，在体内、外构建细胞生长的理想微环境，从而一体化修复骨软骨缺损。方法：取6月龄新西兰兔4只，采用钻孔法制成深5mm达软骨下骨的缺损区域，将胶原海支架植入缺损处，两天后将胶原海取出，提取胶原海上所附着的骨髓细胞，经密度梯度离心法收集成形细胞制成单细胞悬液，取1滴于细胞计数板上行细胞计数，以(5～10)×10-5个/瓶接种于2个25mL培养瓶培养。当细胞生长至90%～100%融合时，以0.25%胰蛋白酶消化，按1,2传代，取第2代细胞备用。倒置相差显微镜下观察原代及传代后细胞形态及生长特性，收集P2细胞，以软骨诱导配方对其进行成软骨的定向分化。结果：将胶原海植入兔膝关节下2天后取出，对附着于胶原上的细胞进行分离培养可获得骨髓来源的贴壁细胞，上述骨髓来源的贴壁细胞在体外培养时表现出来的生物学特性与BMSCs极为相似。原代培养14天后，光镜下可见细胞呈长梭形，细胞间融合与生长良好，并有折光性。结论：通过软骨组织工程方法，采用更适宜的生物材料、更理想的干细胞，进一步构建有良好生物相容性的细胞-双相支架义合物。为细胞的生长、分化提供近似于体内的微环境，一体化修复软骨及软骨下骨以确保远期效果。将成为今后软骨骨缺损修复理念的发展趋势。
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