鸡AvBD2成熟肽优化基因的大肠杆菌表达及抑菌活性研究

来源 :2012第四届中国兽药大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bluelee530
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  根据Genbank公布的鸡β-防御素-2成熟肽基因序列,参考大肠杆菌偏爱密码子,设计并合成大肠杆菌偏爱性鸡β-防御素-2成熟肽基因序列(AvBD20p),将其亚克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-6p-1中,得到重组表达质粒pGEX-6p-1-AvBD20p,同样的方法构建pGEX-6p-1-AvBD2,分别转化到大肠杆菌BL21。用终浓度为0.5mol/L的IPTG进行诱导表达,SDS—PAGE发现表达的融合蛋白分子量约为30kD。用GST纯化树脂纯化后得到单一条带,BCA法测定纯化后的蛋白浓度,发现密码子优化株的蛋白表达量有较大程度的提高。用琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明,鸡AvBD2融合蛋白对革兰氏阳性和阴性菌均有抑茵活性,最小抑菌浓度范围为31.25~125μg/mL。融合蛋白作用后可引起病原菌菌体变形,菌体细胞破裂,菌体成为不规则残片。
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