胸膜肺炎放线杆菌三聚体自转运粘附素功能结构域的确证及其主要生物学活性比较

来源 :2012第四届中国兽药大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hao999999
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  胸膜肺炎放线杆菌(APP)是一种组织嗜性很强的革兰氏阴性菌,主要黏附、定植猪肺上皮细胞。黏附是APP定植和致病的重要过程。本实验室前期首次发现APP血清5b型菌株L20存在完整的三聚体自转运蛋白(命名为Aad1),为确定APP三聚体自转运粘附蛋白的功能结构域及其生物学特性,将APP三聚体自转运蛋白Aad 1承载区域124—325 5序列分6段克隆入原核表达载体,在大肠杆菌中进行诱导表达,并对6种重组蛋白进行粘附活性比较,结果发现124—612aa区域所表达的蛋白黏附活性最强(命名为adh)。将本区域adh基因运用同源重组的方法进行敲除(Δadh菌株),与亲本野生株进行体内外生物学特性比较,发现△adh菌株粘附宿主细胞活性显著下降,生物被摸形成活性显著降低,菌体自凝现象几乎丧失,菌体生长速度明显加快。感染仔猪后初期临床症状明显减轻,后期症状差别不显著,可能与基因敲除株生长速度较快有关。证明adh是重要的粘附结构域,不但与菌体粘附、被膜形成功能相关,而且与菌体的生长速度、致病性有关。这为三聚体自转运粘附素在APP感染中的机制及亚单位疫苗研究奠定基础。
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