【摘 要】
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目的:研究头孢妥仑敏感性降低肺炎链球菌的耐药机制。方法:收集2009年1月至2010年1月来自全国10所教学医院的37株头孢妥仑最小抑菌浓度(MIC)≥1 mg／L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为研究组，并取6株头孢妥仑MIC≤0.5 mg／L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为对照组。采用微量肉汤稀释法测定菌株对青霉素、阿莫西林-克拉维酸、头孢呋辛、头孢克洛、头孢妥仑、头孢曲松、阿奇霉素、克拉霉素、左氧
【机 构】
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云南省大理州人民医院检验科 中国医科大学附属第一医院
【出 处】
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中华医学会第三届感染与抗微生物治疗论坛、第九届全国感染性疾病及抗微生物化疗学术会议、第一届上海国际临床微生物及抗微生物化
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目的:研究头孢妥仑敏感性降低肺炎链球菌的耐药机制。
方法:收集2009年1月至2010年1月来自全国10所教学医院的37株头孢妥仑最小抑菌浓度(MIC)≥1 mg／L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为研究组，并取6株头孢妥仑MIC≤0.5 mg／L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为对照组。采用微量肉汤稀释法测定菌株对青霉素、阿莫西林-克拉维酸、头孢呋辛、头孢克洛、头孢妥仑、头孢曲松、阿奇霉素、克拉霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、万古霉素等11种药物的最低抑菌浓度。根据药敏试验结果将菌株分为3组:3株对青霉素敏感、头孢妥仑MIC值≤0.5 mg／L作为C1组；3株对青霉素中介、头孢妥仑MIC值≤0.5 mg／L作为C2组;37株对青霉素中介，头孢妥仑MIC为1～4 mg／L的为R组。采用PCR法扩增43株菌的pbp2b、pbp1a、pbp2x、murM、ermB和mefA基因。用限制性内切酶进行pbp2b、pbp1a、pbp2x的指纹图谱分析。根据酶切试验分型结果，同一型的菌株挑选1～5个PCR产物送测序，测序结果与肺炎链球菌标准菌株R6比较以分析耐药菌株的青霉素结合蛋白保守基序，特别是SXXK盒、SXN盒、KT(S)G盒的突变情况。
结果:37株对青霉素中介。头孢妥仑MIC为1～4μg／ml(R组)的肺炎链球菌对左氧氟沙星、莫西沙星和万古霉素均敏感，对头孢呋辛、头孢克洛、阿奇霉素和克拉霉素均耐药，仅有8.2％和5.4％的菌株分别对阿莫西林-克拉维酸和头孢曲松敏感。C1组菌的PBP氨基酸保守基序与R6株相比无突变。C2组菌PBP氨基酸保守基序与R6株相比在以下位点发生了氨基酸替换：PBP2B中Thr445→Ala；PBP1A中Thr371→Ser／Ala、Pro432→Thr；PBP2X中Thr338→Ala、Leu546→Val。R组菌株PBP氨基酸保守基序与R6株相比则在C1组突变的基础上增加了2～3个活性位点的突变，包括PBP2B中Ala618→Gly，PBP2X中Met339→Phe和Tyr595→Phe。MurM的序列在65～128区域与R6相比只有C2组7号菌发生了8个氨基酸替换，其余菌株均只发生1个氨基酸替换。43株菌中40株检出ermB基因，37株检出mefA基因。
结论:PBP2B、PBP1A和PBP2X的突变与肺炎链球菌的头孢妥仑耐药性密切相关，特别是PBP2B的Ala618→Gly，PBP2X的Met339→Phe和Tyr595→Phe可能与头孢妥仑MIC升高相关。
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