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目的:研究miR-181a对肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化及其介导的肿瘤细胞侵袭和转移的影响,并初步探讨其作用机制.
方法:选用人白血病单核THP-1细胞,通过PMA使其诱导为Mφ巨噬细胞,然后加入LPS诱导为M1-TAM或加入IL-4诱导为M2-TAM;ELISA方法检测细胞培养基中TNF-α等因子的含量.流式细胞仪检测TAM特异性标记物CD86+、CD163+、CD206+的比例;分别应用Real-time PCR和Western blot方法检测TAM特异性标志物和目的蛋白的mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测TAM特异性分泌因子的表达水平;通过生物信息学预测与miR-181a的结合能力,同时运用荧光素酶报告基因技术分析miR-181a与基因的靶向结合活性.通过Transwell检测肿瘤的侵袭和转移能力.
结果:miR-lgla在M2-TAM细胞中的表达高于M1-TAM细胞,转染miR-181a inhibitor至M2细胞中抑制内源性miR-181a表达,可使M2细胞向M1方向极化,转染miR-181amimic至M1细胞中诱导miR-181a高表达,可促进M1细胞向M2方向极化;荧光素酶报告基因分析证实miR-181a可与C/EBPα和KLF6 mRNA-3UTR结合;诱导乳腺癌细胞MCF-7中miR-181a过表达后可下调C/EBPα和KLF6表达;促进巨噬细胞向M2表型极化.抑制M2细胞中miR-181a表达可抑制M2细胞对肿瘤侵袭转移的促进作用.
结论:miR-181a可通过靶向抑制C/EBPα和KLF6的表达促进巨噬细胞向M2表型极化及其介导的肿瘤细胞侵袭和转移.