超声辐照下携载AR siRNA的纳米级微泡抑制AIPC生长的体外实验研究

• 作 者: 郭燕丽[1]张淼[1]谭开彬[2]王洛夫[3]李锐[1]华兴[1]丁俊[1]
• 机 构: 第三军医大学西南医院超声科,重庆,400038
• 出 处: 1st International Symposium on Ultrasound Molecular Imaging
• 发表日期: 2012年期

　　目的 制备携载雄激素受体(AR)的siRNA的纳米级微泡,研究和探讨其联合超声辐照在体外抑制AR表达和对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞的生长抑制作用.方法 应用多聚赖氨酸法和静电吸附法在纳米级脂质微泡的基础上制备携载AR siRNA的纳米级微泡,分析其物理特性和体内显像效果.同时联合超声辐照,以人前列腺癌细胞(LNCap、C4-2和PC-3,其中C4-2为AIPC细胞,LNCap为雄激素依赖性细胞,二者均表达AR,PC-3为AIPC细胞,不表达AR)为研究对象,分为6组：①裸AR siRNA+空白纳米级微泡；②携载AR siRNA的纳米级微泡；③裸AR siRNA+超声辐照；④空白纳米微泡+超声辐照；⑤裸AR siRNA+空白纳米级微泡+超声辐照；⑥携载AR siRNA的纳米级微泡+超声辐照.RT-PCR和Weston blot检测AR mRNA和AR蛋白表达水平,荧光显微镜、流式细胞仪评价细胞转染率,CCK-8法分析转染后细胞生长活性.结果 成功制备携载ARsiRNA的纳米级脂质微泡,显微镜下微泡大小均匀性好,无聚集发生.荧光显微镜观察,微泡与Cy3标记的ARsiRNA结合后发出红色荧光.微泡粒径为(609.5±15.6)nm.转染后24 h光镜观察C4-2和LNCap细胞的裸ARsiRNA+超声辐照组、裸ARsiRNA+空白纳米级微泡+超声辐照组和携载ARsiRNA的纳米级微泡+超声辐照组均出现细胞形态变化,48 h变化明显,主要表现为细胞轮廓模糊,形态萎缩,生长缓慢,而PC-3细胞形态变化不明显.CCK8分析结果显示：C4-2和LNCap细胞的上述三组siRNA转染C4-2细胞后均可以达到较明显的生长抑制效果,其中C4-2细胞的携ARsiRNA纳米级微泡+超声辐照组的生长抑制率最高,为64.7％,与其余各组或PC-3转染各组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR和Western blot结果显示：上述三组C4-2和LNCap细胞的AR mRNA和AR蛋白表达分别受到不同程度的抑制,其中携载ARsiNA的纳米级微泡+超声辐照组的抑制作用最为明显.结论 本研究所制备的携载ARsiRNA的纳米级脂质微泡转染C4-2、LNCap和PC-3细胞,在超声辐照下能有效释放ARsiRNA,并能有效抑制C4-2和LNCap细胞AR mRNA和蛋白的表达水平,进而抑制两种前列腺癌细胞的生长.本研究为下一步超声辐照下携载ARsiRNA纳米级微泡作为体内基因载体,以治疗AIPC肿瘤提供了实验依据和研究基础.