论文部分内容阅读
位点特异性核酶技术是近年来发展起来的基因修饰新技术，为实验动物基因组的高效修饰提供了有力武器。小型猪是我国独具优势的实验动物资源，建立其高效的遗传修饰技术体系是有效应用的重要支撑。我们以NPC1 L1基因的第二外显子为靶点，通过CRISPR/Cas9(RNA-guided nuclease)技术高效制备了NPCl L1基因敲出小型猪，首建猪的基因敲出效率可高达100％，显著高于TALEN分子介导的基因敲出，说明CRISPR/Cas9技术具备更高的针对猪基因组的修饰能力。此外，我们首次发现含哺乳动物核定位信号的巨核酶(Meganuclease) I-SceI分子NLS-I-SceI可在哺乳动物胚胎细胞中将DNA片段从胞质转运至胞核，并基于NLS-I-SceI分子介导的基因转移高效地获得了转基因猪，表明核酶分子NLS-I-SceI具备高效的介导哺乳动物基因转移的能力。上述研究数据为建立完善的基于核酶分子的小型猪基因敲出和转基因体系奠定了基础。