【摘 要】
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[目的]从猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中克隆到一个无同源差异基因(Musca dom-estica no homologous gene,Md-N),并在大肠杆菌中表达,以期从家蝇体内寻找具有抗猪肺炎支原体活性的抗菌蛋白.[方法]以猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫的cDNA为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)对Md-N进行扩增,根据拼接得到的全长序列设计特异性引物进行PCR
【机 构】
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吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院,长春130118;吉
【出 处】
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2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会
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[目的]从猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库(SSH)中克隆到一个无同源差异基因(Musca dom-estica no homologous gene,Md-N),并在大肠杆菌中表达,以期从家蝇体内寻找具有抗猪肺炎支原体活性的抗菌蛋白.[方法]以猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫的cDNA为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)对Md-N进行扩增,根据拼接得到的全长序列设计特异性引物进行PCR扩增后进行序列同源性分析.选用pGEX4T-1表达载体构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Md-N,将其转化至大肠杆菌BI21(DE3)进行原核表达.表达产物用GST Sepharose Beads重力层析柱纯化融合蛋白并进行活性分析.[结果]Md-N基因全长495bp,序列分析结果表明,在GeneBank中未找到与其具有高度同源性的基因序列；成功构建了具有正确序列的重组表达质粒pGEX-4T-1-Md-N；重组蛋白在诱导温度37℃、0.6mmoL/L IPTG诱导7h的条件下,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,分子量约为43 kDa；体外活性检测结果表明,融合蛋白对猪肺炎支原体具有抑制作用.[结论]重组工程菌表达得到Md-N基因的融合蛋白,且具有抑制猪肺炎支原体生长的作用,其在兽医临床具有良好的应用前景.
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