【摘 要】
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目的 H19作为最早被发现和探讨的少数几个非编码RNA分子之一,推测其在对多种器官的发育和疾病情况都有重要的调控功能.然而,H19的具体作用的分子机制仍然未知.本研究试图
【机 构】
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第二军医大学基础医学部医学遗传教研室,上海,200433
【出 处】
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中华医学会2012年医学遗传学年会暨全国第十一次医学遗传学学术会议
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目的 H19作为最早被发现和探讨的少数几个非编码RNA分子之一,推测其在对多种器官的发育和疾病情况都有重要的调控功能.然而,H19的具体作用的分子机制仍然未知.本研究试图确定与H19结合的蛋白成分,从而为其功能和调控机制的研究提供线索和依据.方法 利用肝癌细胞Hepa3B和Huh-7,分别了进行RNA pulldown、截短体及RIP实验,其次在过表达H19和干扰hnRNPU处理后,分别进行EU(5,-乙炔基尿嘧啶)掺入分析,以及western blotting检测RNA聚合酶Ⅱ CTD(C端重复结构域)磷酸化改变情况.结果 在包含H19的胞浆颗粒成分分析中发现,与H19相互作用的蛋白成分为hnRNPU,且通过截短体实验进一步确定其结合的区域位于H19 5端的882nt.其次在H19的功能研究中发现,肝癌细胞Hepa3B和Huh-7过表达H19时,EU的掺入明显减少,同时RNA聚合酶Ⅱ CTD的磷酸化受到明显抑制.而当过表达H19同时干扰hnRNPU时,EU的掺入相对增多,而RNA聚合酶Ⅱ CTD的磷酸化的抑制也被削弱,结果显示H19与hnRNPU不仅存在物理上的结合,功能上也紧密联系.结论 H19通过与hnRNPU的结合抑制RNA聚合酶Ⅱ CTD的磷酸化,进而抑制肝癌细胞的整体转录.
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