【摘 要】
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目的 对感觉传导通路的第一站——背跟神经节(DRG)中神经元与胶质细胞进行研究,旨在对内脏痛觉的产生机制有进一步的了解,寻找治疗的新靶点.方法 给SD大鼠单次直肠灌注2,
【机 构】
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200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 对感觉传导通路的第一站——背跟神经节(DRG)中神经元与胶质细胞进行研究,旨在对内脏痛觉的产生机制有进一步的了解,寻找治疗的新靶点.方法 给SD大鼠单次直肠灌注2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)建立炎症性内脏高敏感模型.取脊髓L6～S2节段DRG通过RT-PCR和Western印迹法检测TNF-α的mRNA和蛋白表达.通过免疫组织化学方法与胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)标记的卫星胶质细胞(SGC)共染色对TNF-α进行定位,并观察这些SGC的显微结构的变化.快速截取带脊神经的DRG,强直连续脉冲(12.5-25-50 Hz)刺激脊神经,ELISA法检测刺激前后溶液中TNF-α的浓度.用TNF-α处理原代培养DRG神经元,全细胞膜片钳技术检测神经元兴奋性的改变.对大鼠鞘内注射TNF-α拮抗剂,进行腹部回缩反射(AWR)评分检测内脏敏感性；并急性分离DRG神经元,电流钳记录其动作电位的发放.结果 在TNBS诱导的大鼠中,TNF-α在DRG中表达增高,并主要表达在围绕在神经元周围的GFAP染色的SGC中.在电子显微镜下观察到,与对照组相比,TNBS组SGC发出更多细长的突触,与周围的结缔组织间隙发生更多的联系；SGC相互之间也有更多的缝隙连接.经电刺激脊神经纤维,TNBS组DRG可释放出更多的TNF-α.在外源性给予TNF-α(2.5 ng/mL)的环境下DRG神经元兴奋性显著增高.大体实验中,鞘内注射TNF-α抗体(10 μg·kg-1·d-1)可以逆转大鼠内脏疼痛的反应,再次通过膜片记录这些大鼠的DRG神经元,动作电位的发放频率明显低于模型组大鼠,与对照组差异无统计学意义.结论 DRG中SGC的活化与促炎因子TNF-α的释放介导了神经元与胶质细胞间的相互作用,即交互兴奋,而这一过程在炎症性内脏痛觉转导中占有非常重要的作用.
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