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本文旨在研究三种黑素皮质素4受体(MC4R)激动剂和拮抗剂对鸡MC4R (cMC4R) WT及4个突变体(Q18H、G21R、S76L和L299P)cAMP/PKA信号通路的影响,建立了基于cMC4R信号通路以cMC4R为靶点的细胞筛选模型.将cMC4R WT及4个突变体的真核表达质粒与萤火虫荧光素酶报告基因质粒pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro]、海肾荧光素酶内参质粒pRL-TK共转染入HEK293T细胞,应用双报告基因法检测受体在无配体作用时荧光素酶的表达水平；检测受体在激动剂(α-MSH、β-MSH、NDP-MSH)的作用下荧光素酶的表达量；将cMC4R WT真核表达质粒与报告基因质粒、内参质粒共转染HEK293T细胞,检测受体在拮抗剂SHU9119和激动剂(α-MSH、β-MSH、NDP-MSH)的共同作用下荧光素酶的表达量.将cMC4R WT真核表达质粒与报告基因质粒按1∶5的比例共转染到CHO-K1细胞,经G418(800μg/m1)和潮霉素B(400μ g/ml)抗性筛选后,利用有限稀释法获得稳定表达目的基因的单克隆细胞株,利用RT-PCR从转录水平验证了目的基因的表达；排查cMC4R阳性细胞株内源性干扰,构建稳定表达cMC4R和萤火虫荧光素酶的细胞系；优化细胞筛选模型中配体浓度、作用时间以及二甲基亚砜(DMSO)溶剂的用量；采用Z'因子评估系统的稳定性和可靠性.结果显示,Q18H的基础活性极显著高于WT (P＜0.01),L299P的基础活性极显著低于WT (P＜0.01),G21R和S76L的基础活性与WT的相比差异不显著(P＞0.05).对于cMC4R WT及4个突变体,三种激动剂的内在活性为：NDP-MSH＞α-MSH=β-MSH.4个突变体中cMC4R L299P的cAMP水平极显著低于cMC4R WT (P＜0.01),说明该突变对cMC4R结构和功能的影响较大,使cMC4R几乎失去了与激动剂的结合能力.无论何种激动剂与cMC4R WT作用,高浓度和中浓度的SHU9119都能够显著抑制激动剂的激动作用,低浓度的SHU9119抑制作用不明显.经有限稀释法获得了萤火虫荧光素酶的相对表达量最高的单克隆阳性细胞株A2；RT-PCR在预期位置扩增出两条目的条带；对细胞筛选模型进行优化显示,当激动剂NDP-MSH终浓度为10-9mol/L,NDP-MSH孵育时间为8h,溶剂DMSO终浓度小于2％时,筛选模型Z'因子为0.82,说明建立的筛选方法可靠、稳定,可以用于cMC4R激动剂和反向激动剂的筛选.本实验证实了cMC4R WT及4个突变体(Q18H、G21R、S76L、L299P)真核表达质粒能在体外细胞中表达,且具有生物学活性.成功建立了以cMC4R为靶点的细胞筛选模型,为筛选出cMC4R激动剂和反向激动剂奠定了基础.