【摘 要】
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目的:研究miR-568在CD4+T细胞及调节性CD4+T细胞(Treg)活化过程中的作用,寻找miR-568的下游靶基因,从而明确其分子机制.方法:1.基因芯片筛选与T细胞活化相关的候选miRNA,实时
【机 构】
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第四军医大学基础部免疫学教研室 陕西 西安 710032
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目的:研究miR-568在CD4+T细胞及调节性CD4+T细胞(Treg)活化过程中的作用,寻找miR-568的下游靶基因,从而明确其分子机制.方法:1.基因芯片筛选与T细胞活化相关的候选miRNA,实时定量PCR验证候选miRNA在Jurkat和人CD4+T细胞活化前后的表达情况.2.流式细胞术检测转染miR-568的Jurkat及人CD4+T细胞活化前后表面活化标志的表达情况.3.软件预测miR-568的靶基因,并用双荧光素酶报告基因实验、实时定量PCR和Western Blot等方法加以验证.4.用实时定量PCR、ELISA检测转染miR-568的Jurkat及人CD4+T细胞活化前后IL-2的表达情况,并用MTT检测miR-568对人CD4+T细胞增殖的影响.5.免疫磁珠分离人CD4+CD25+Treg细胞,检测Treg细胞活化前后miR-568的表达变化.6.ELISA检测转染miR-568对Treg细胞活化后分泌效应细胞因子IL-10和TGF-β的影响.7.MTT检测miR-568对Treg细胞增殖的影响.8.CCK-8检测miR-568对Treg细胞抑制效应T细胞增殖的影响.结论:miR-568是CD4+T细胞活化相关的miRNA,NFAT5是其下游靶基因,miR-568可能通过NFAT5间接影响IL-2的水平,从而抑制CD4+T淋巴细胞的活化.miR-568对Treg细胞的活化、增殖和分化也具有明显的抑制作用.
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