【摘 要】
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长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的生物合成对于鱼类乃至所有脊椎动物都非常重要。首个完整的海水鱼LC-PUFA合成途径由本课题组在黄斑蓝子鱼(Siganus canaliculatus)中被阐明,其中包括两个相似度为83％的脂肪酸去饱和酶(Fad),即△6/△5 Fad和△4 Fad,它们分别承担LC-PUFA合成途径中3步不同的去饱和反应。为了揭示蓝子鱼两个Fad的底物识别特异性,阐明去饱和酶
【机 构】
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汕头大学海洋生物研究所,广东省海洋生物技术重点实验室,广东汕头515063
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长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的生物合成对于鱼类乃至所有脊椎动物都非常重要。首个完整的海水鱼LC-PUFA合成途径由本课题组在黄斑蓝子鱼(Siganus canaliculatus)中被阐明,其中包括两个相似度为83％的脂肪酸去饱和酶(Fad),即△6/△5 Fad和△4 Fad,它们分别承担LC-PUFA合成途径中3步不同的去饱和反应。为了揭示蓝子鱼两个Fad的底物识别特异性,阐明去饱和酶功能的分子基础,本研究首先根据预测的跨膜区和疏水区将每个Fad序列分为3段并相互置换,构建6个嵌合体,在酿酒酵母表达系统中进行功能鉴定,发现位于中间区段的第二跨膜区和一个疏水区是包含底物识别的关键序列。然后用类似方法将关键序列再次分成3段,研究每一小段序列对底物识别的影响,进而确定了Fad底物识别的关键区域为290位左右的由15个氨基酸组成的一小段疏水片段,这段氨基酸序列恰好位于生物信息学预测的两个跨膜区的亲水区域之间。在此基础上,确定了△6/△5 Fad的K284到W297以及△4 Fad的M285到A300是决定蓝子鱼去饱和酶各自底物识别的特异性核心序列。
其他文献
构建草鱼前体脂肪细胞培养体系,分别收集分化0、1、3、5、7天的细胞样品进行检测.油红O染色提取法观测脂质蓄积情况；酶标法检测3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)酶活性；透射电镜观察细胞分化过程中线粒体显微结构的变化；实时定量PCR检测细胞分化及线粒体发育相关基因的表达；提取细胞胞浆与线粒体蛋白,分析细胞分化过程中线粒体蛋白含量的变化；线粒体荧光探针染色观察细胞分化过程中线粒体数量的变化.结果表明,草鱼
克隆了大菱鲆小肽转运载体peptide transporter Ⅰ(PepT1)基因全长cDNA,并进行了序列分析.大菱鲆PepT1全长2629bp,5端非编码区长度为69bp,3端非编码区为,预测编码860个氨基酸.同源性对比发现大菱鲆PepT1与大西洋鲑(Salmo Salar)PepT1 cDNA全序列(AB455540)相似性为75％,与斑马鱼(Danio rerio)小肽转运蛋白cDNA
本实验以初始体重(5.17±0.01)g大菱鲆幼鱼为研究对象，研究了胆固醇对于大菱鲆幼鱼摄食、生长和胆固醇代谢的影响.实验以65％的脱脂鱼粉和21％的小麦粉为基础饲料，在此基础饲料中分别添加0％、0.5％、1％、1.5％和2％的胆固醇，制成五种等氮等脂饲料，进行了为期10周的养殖实验.结果表明，随饲料中胆固醇含量的提高，增重率呈显著上升趋势，而摄食率没有显著性差异.血清中TC、FC、CE、HDL-
本养殖试验使用含50％脱壳豆粉之饲料投喂甲鱼进行八周之饲料锌需求试验.八组试验饲料之实测锌浓度分别为27,46,65,85,105,124,151,178 mg/kg,饲料之植酸分析值为11.2 g/kg.投喂27 mg Zn/kg饲料之甲鱼成长最低.骨骼与背甲锌浓度随着饲料锌含量增加而上升,直到约85 mg Zn/kg后趋于稳定.以回归模式分析并使用增重率、骨骼与背甲锌浓度为指标,求得在饲料含5
采用RACE技术克隆大菱鲆肝脏糖异生途径关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK细胞质型(C型)和线粒体型(M型)基因的cDNA全长序列.结果显示：大菱鲆PEPCK-C基因(KC149516)cDNA全长2833bp,开放阅读框1875bp,编码624个氨基酸；PEPCK-M基因(KC149517)cDNA全长3124bp,开放阅读框1908bp,编码635个氨基酸.大菱鲆的PEPCK-C和PEP
采用76d的生长实验、显微和超微病理观察确定共轭亚油酸(CLA)显著降低瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)肝脏脂肪含量且不影响其生长和组织、细胞结构的适宜添加量(CLAOPT).CLA的添加量分别为：0％(对照组,Control)、0.5％(CLA0.5)、1％(CLA1)、2％(CLA2)和3％(CLA3).随后,通过对CLAOPT组和对照组肝脏的比较转录组研究,筛选出关键
为了研究氧化鱼油对草鱼肠道粘膜的损伤作用和基因表达差异性,对草鱼(均重108.4±6.2g)连续灌喂氧化鱼油7d后,导致肠道绒毛损伤、粘膜脱落.提取肠道粘膜组织总RNA,采用RNA-Seq方法,有455个基因差异表达显著(fold≥3.0,fold≤-3.0),其中253个基因差异表达显著上调(fold≥3.0)、202个基因差异表达显著下调(fold≤-3.0).采用IPA基因通路分析方法,有1
将团头鲂(50g)饥饿20d后,重新投喂3种等氮、等脂不同淀粉水平(0％,20％和40％)的饲料20d,以探讨短期饥饿和恢复摄食过程中团头鲂代谢反应,以及饲料淀粉水平对团头鲂代谢恢复的影响。结果表明：饥饿7d,团头鲂肝体比、肝脏、肌肉糖元及血清甘油三酯含量急剧下降至较低水平；而鱼体重、血清总蛋白和葡萄糖含量则在20d内缓慢降低；肝脏PK和G6PDH活力随饥饿时间增长而缓慢下降,FBPase则成相反
本试验旨在研究豆粕替代鱼粉对大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)幼鱼IGF-1和IGF结合蛋白(IGFBP1、IGFBP2、IGFBP4、IGFBP5)mRNA水平的影响.设计三种实验饲料分别为鱼粉对照组(FM)、豆粕替代45％鱼粉蛋白组(SB)、SB组添加必需氨基酸(EAA)组(SB+AA),分别饱食投喂30天,禁食48h后重新投喂相应饲料,在0h(禁食)、2h、8h和24h
本研究克隆得到了黄颡鱼瘦素(leptin)及其受体基因的cDNA序列,分析了其组织表达模式,探讨了黄颡鱼性腺发育不同阶段leptin表达与脂类代谢的关系。结果如下：黄颡鱼leptin基因cDNA全长序列为1191bp,其中包含84 bp的5-untranslated region(UTR),589 bp 3-UTR以及516bp的开放阅读框,编码172个氨基酸(aa),黄颡鱼leptin rece