【摘 要】
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目的 载脂蛋白A1作为高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白成分,是发挥抗动脉粥样的关键成分.近年来体内、外研究显示,人工合成载脂蛋白A-I模拟肽D-4F具有良好的抗动脉粥样硬化作用.本研究旨在观察反式结构的D-4F(R-D4F)是否具有与D-4F相似的生物学作用,尤其是在预防血管损伤后血管壁重构的作用.方法 本研究选取成年C57BL/6J雄性小鼠随机给予安慰剂、D-4F(1mg/kg)、低剂量R-D4
【机 构】
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扬州大学第二临床医学院心血管内科,225001
【出 处】
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2013中国医师协会中西医结合医师大会
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目的 载脂蛋白A1作为高密度脂蛋白(HDL)的主要蛋白成分,是发挥抗动脉粥样的关键成分.近年来体内、外研究显示,人工合成载脂蛋白A-I模拟肽D-4F具有良好的抗动脉粥样硬化作用.本研究旨在观察反式结构的D-4F(R-D4F)是否具有与D-4F相似的生物学作用,尤其是在预防血管损伤后血管壁重构的作用.方法 本研究选取成年C57BL/6J雄性小鼠随机给予安慰剂、D-4F(1mg/kg)、低剂量R-D4F(1mg/kg)或高剂量R-D4F(5mg/kg),每日腹腔注射一次,总共持续三天.随后通过结扎小鼠左颈总动脉制造动脉损伤模型.术后继续给予相应的药物治疗直到术后第28天,处死动脉留取血清标本及颈动脉组织标本,分别测定血脂水平,采用免疫组织化学染色测定颈动脉局部炎症细胞浸润；采用Verhoeffs弹性蛋白染色测定新生内膜形成；采用实时定量PCR检测炎症因子VCAM-1、CD11b、MCP-1 mRNA的表达.同时在体外培养的RAW264.7细胞,分别给予了D-4F、 R-D4F、空白对照预处理1h时后,再给予脂多糖刺激12h,采用蛋白质印迹法检测白细胞整合素CD11b的表达.结果 与假手术相比,动脉接扎后可诱导损伤血管新生内膜的大量形成,同时伴有局部显著的炎症细胞浸润以及炎症介质表达.与D-4F治疗相似的是,同剂量的R-D4F治疗可显著的抑制受损动脉新生内膜的形成(可达-42％,P＜0.05),并减少局部中性粒细胞和单核细胞的浸润以及炎性介质单核细胞趋化蛋白1(-55％)和血管细胞粘附蛋白1(-53％)的表达.相比低剂量组R-D4F,高剂量R-D4F治疗可进一步抑制新生内膜新成以及局部炎症反应.然而,无论是R-D4F还是D-4F治疗并不影响小鼠外周血脂水平.在RAW264.7细胞,脂多糖刺激可显著上调CD11b的蛋白表达水平,而R-D4F预处理可有效抑制LPS诱导的CD11b表达.结论 高密度脂蛋白(HDL)的抗动脉粥样硬化已得到证实.由于纯化天然HDL成本高昂,载脂蛋白A-I作为HDL功能的主要执行者,采用人工合成载脂蛋白A-I的模拟肽可望成为抗动脉粥样硬化治疗的一种有效手段.先前研究已证实,载脂蛋白A-I模拟肽D-4F在体内外能有效防止动脉粥样硬化,但作为其左手性镜像序列的反式D-4F,后者由于兼具右手性和反转顺序的特征,有可能发挥不同于D-4F的抗AS新特性.在本研究中,我们观察到,等同剂量的R-D4F与D-4F可发挥相似的抑制新生内膜作用,并且R-D4F看来还具有一定的剂量依赖效应.与此同时,R-D4F治疗也可有效抑制脂多糖刺激的炎症细胞表面CD11b的表达,这一结果提示,直接调节炎症细胞表明整合素蛋白CD11b的表达可能是R-D4F发挥抗炎效应,尤其是抑制炎症细胞浸润的重要机制.上述这些结果表明,反式载脂蛋白A-I模拟肽R-D4F可显著抑制小鼠颈总动脉结扎术后诱导的新生内膜形成,这可能与其抗炎效应有关.
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