论文部分内容阅读
以同源基因克隆、重组DNA、荧光定量等技术，探讨了大黄鱼和眼斑拟石首鱼的piscidin-like生物学特性和免疫应答机制、分析其类肽的生物学功能和稳定性。主要结果：(1)piscidin-like基因序列:从大黄鱼和眼斑拟石首鱼头肾和肌肉组织，克隆了2条piscidin-like肽，分别为Pc-pis和So-pis它们基因的cDNA序列长度分别为345和369bp，编码长度分别为72和68个AA，均由信号肽、成熟肽和优势域组成。(2)Pc-pis和So-pis的生物学活性:Pc-pis等电点为12.10，为阳离子多肽，So-pis等电点为7.02，是中性多肽；Pc-pis和So-pis的α-螺旋结构两亲性低于其它已知大部分鱼类piscidins。(3)以刺激隐核虫感染刺激，诱导Pc-pis和So-pis mRNA的表达:荧光定量数据显示，刺激隐核虫感染和继发性细菌感染均可诱导Pc-pis和So-pis表达量显著上调，但So-pis和Pc-pis的诱导表达有所不同。(4)原核表达比较：根据已获得的眼斑拟石首鱼抗菌肽So-pis和大黄鱼Ps-pis类肽—Pc-pis-His序列，构建了融合表达载体pET-32a-So-pis和pET-32a-Pc-pis-His。优化表达条件后，2个多肽主要以可溶性形式表达，经过纯化、western blot鉴定确实为目的多肽。所构建的Pc-pis-His重组多肽技术将为抗菌肽基因工程产品作为添加剂在水产养殖业中的应用提供重要技术支撑。