论文部分内容阅读
“白芷-石菖蒲”是中医临床常用药对,主要用于治疗中风及其后遗症[1].花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素是中药白芷中的三种呋喃香豆素类化合物.他们是白芷发挥抗炎、抗肿瘤等作用的主要活性成分.由于这些香豆素的口服生物利用度较低,因而限制了其药效的发挥.P-gp 是一种ATP依赖型药物外排泵,它的主要作用是将药物或其它化学物质排至细胞外.通过抑制P-gp 对其底物的外排,可促进其活性底物在小肠的吸收,进而增强药效的发挥.因此,本实验应用大鼠在体肠灌流法结合RP-HPLC,研究了石菖蒲挥发油对花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素在小肠吸收的促进作用,并进一步探究了其促进肠吸收的作用机制,从而为“白芷-石菖蒲”配伍机制提供一定的研究基础.方法：本实验采用250±20 g的SD大鼠禁食过夜,自由饮水.手术前以10％的水合氯醛腹腔注射麻醉.沿腹中线切开,选取空肠和回肠作为研究对象[2].通过乳胶管和蠕动泵将含有一定浓度白芷提取物(或含有维拉帕米或石菖蒲提取物)的Krebs-Ringer缓冲液对目标肠段进行灌流.流路入口处连接已知重量的装有供试液的小瓶,在出口连接已知重量的小瓶每隔15 min 收集1次(同时迅速更换下一个供试液小瓶和收集液小瓶),称量灌流后供试液小瓶和收集液小瓶的重量,连续灌流90 min.最后,剪下各肠段,精密计量其长度及横截面半径.然后采用RP-HPLC 法测定收集的灌注液中花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素的浓度.色谱条件如下：Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm),流动相为0.2％甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～9 min,17％B；10～35 min,25％B；36～46 min,100％)；检测波长为254 nm；流速1.0 mL/min；柱温30 ℃；进样量50 μL(见图1).参照文献[3],采用重量法计算在小肠中的药物吸收速率常数Ka及药物表观吸收系数Papp.所有数据以x±s 表示,两组间比较用 spss 18.0 统计软件进行t 检验.结果：大鼠单向在体肠灌流模型研究表明,花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素的质量浓度对Ka和Papp 均有显著性影响.这三种化合物的吸收随着浓度的增加而递增,但当总香豆素浓度超过100μg/mL(花椒毒酚：1.68±0.08μg/mL；水合氧化前胡素：3.51±0.45μg/mL；白当归素：2.07±0.19 μg/mL)时,其 Ka 和Papp 值随着浓度的增加逐渐减小.P-gp 抑制剂维拉帕米能促进花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素的吸收,并使三者 Papp 分别增大至2.13,1.89,1.61 倍；石菖蒲挥发油能够加强花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素的吸收,并使三者 Papp 分别增大至1.22,1.43,1.38 倍；花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素在大鼠空肠和回肠均有吸收,水合氧化前胡素和白当归素的吸收窗可能为空肠,而花椒毒酚在空肠和回肠吸收的Papp 无显著差异.结论：花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素的吸收机制可能为 P-gp 参与介导的主动转运；石菖蒲挥发油能够促进花椒毒酚、水合氧化前胡素和白当归素小肠吸收的机制之一可能与石菖蒲挥发油能够抑制 P-gp 对其底物外排有关.