圣脑康丸减方对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的作用研究

来源 :第二十届全国色谱学术报告会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wqkabc0
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  缺血性脑血管疾病为致死致残率均很高的常见病,其治疗过程中造成的脑缺血/再灌注损伤更是严重危害人类健康,如何保护脑缺血再灌注损伤已成为当今医学领域的重要研究课题.圣脑康丸减方由丹参、黄芪、葛根、川芎、赤芍和水蛭组成,由临床应用于各类急、慢性脑血管病治疗的圣脑康丸减方而来.本研究对圣脑康丸减方中有效活性进行含量测定,并探讨其对大鼠脑缺血/再灌注损伤的作用.方法:本研究采用HPLC 定量检测丹参、川芎、黄芪、葛根等药材提取液中丹参素、原儿茶醛、芍药苷、葛根素、阿魏酸、丹参酮ⅡA 及黄芪甲苷含量.采用Waters Symmetry ShieldTM RPC18(250 mm×4.6mm,3.5 um)色谱柱,柱温:30℃,流动相:甲醇(A)-0.25%体积比冰醋酸水溶液(B),流速:1 mL/min,梯度洗脱:0-5 min,10%-20%A;5-10 min,20%-25%A;10-20 min,25%-30%A;20 min-30 min,30%-80%A;30 min-35 min,80%A;35 min-40 min,80%-100%A,用紫外检测器,检测波长为280 nm,采用蒸发光散射检测器,飘移管温度90℃,气流量2.8 L/min(压缩空气),测定圣脑康丸减方提取液中有效活性组分的含量.采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,通过大鼠神经功能障碍评分、TTC 染色、Niisl 染色等方法综合评价活血化瘀方对大鼠脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用;并通过相关生化指标(MDA、CAT、SOD、TNOS 和iNOS)测定、放射免疫法、免疫组织化学技术、蛋白质印迹法等探讨圣脑康丸减方对大鼠缺血/再灌注损伤的保护机制.结果:HPLC 测得圣脑康丸减方提取液中丹参素、原儿茶醛、芍药苷、葛根素、阿魏酸、丹参酮ⅡA和黄芪甲苷的含量分别为1.15、0.13、4.48、0.80、0.72、0.31、3.12mg/g.药理实验显示,圣脑康丸减方可以显著改善神经功能障碍,减少大鼠大脑梗死体积,增加神经元存活数目,增强SOD、CAT活性,降低MDA 含量,降低iNOS 及TNOS 活性,减少caspase-3 活性细胞数目,下调Bax 蛋白的表达,上调Bcl-2 蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2.结论:圣脑康丸减方对脑缺血/再灌注造成的损伤有保护作用,并且保护机制可能与其抗氧化和抗细胞凋亡等有关.
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