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目的:用多种检测方法对新生期树鼩接种人乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)后体内HBV感染标志进行长期动态观察。
方法:6只树鼩于新生期接种人HBV阳性血清,定期抽血和肝组织活检,应用巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction,nPCR)、荧光定量聚合酶链反应 (fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)、Southern blot、ELISA和免疫组织化学染色等方法动态观察血 清和肝组织中HBV 感染标志的消长,用电镜寻找肝组织内的HBV 颗粒和用光镜观察肝组织病理变化。
结果:至接种后48周,三只动物(1、2和6 号)血清和肝组织标本经多对引物进行的nPCR 均稳定显 示HBV DNA 阳性,肝组织HBV cccDNA 阳性;FQ-PCR 显示血清和肝组织HBV DNA的拷贝数分别为 103~104/ml和107~108/μg 肝组织总DNA;Southern blot 检测显示肝组织存在HBV 复制中间体HBV cccDNA和HBV ssDNA;ELISA 检测显示血清乙肝病毒表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)持续阳性;免疫组化染色可见数量逐步增多的HBsAg 阳性肝细胞。其中的1 号动物至接种后2年余肝组织内仍可测得高拷贝数的HBV DNA,电镜下可见疑似HBV 颗粒。另3 只动物除nPCR 显示肝 组织HBV DNA 阳性条带和FQ-PCR 显示低拷贝数HBV DNA 外,其余的HBV 感染标志均为阴性或一 过性阳性。
结论:新生树鼩能够长期感染HBV,并且HBV能够在树鼩体内稳定复制和长期存在。